六味地黃丸含藥血清對(duì)肝癌自殺基因治療旁殺傷的增效作用.pdf

1、肝癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，惡性程度高，預(yù)后差。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，基因治療給惡性腫瘤的治療帶來(lái)了曙光。腫瘤的基因治療，特別是腫瘤的自殺基因療法，已經(jīng)成為繼傳統(tǒng)的手術(shù)切除、放療、化療等方法后的一種新的抗腫瘤治療措施。但單純自殺基因治療由于目前載體轉(zhuǎn)染效率較低、靶向性不夠等問(wèn)題沒(méi)解決，仍有部分腫瘤細(xì)胞殘余導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)，這是該療法存在的重大缺陷。因而增強(qiáng)旁殺傷效應(yīng)目前已成為提高腫瘤自殺基因治療療效的重要策略。由于縫隙連接機(jī)制是旁觀(guān)者效應(yīng)的

2、重要機(jī)制，故改善腫瘤的細(xì)胞間信息交流(GJIC)是自殺基因療法增效的重要途徑之一。同時(shí)，以往的研究證明：六味地黃丸有提高cAMP的作用，而cAMP的提高又能增加Cx蛋白的表達(dá)，從而提高GJIC功能而增強(qiáng)自殺基因治療的旁殺傷效應(yīng)。 本研究應(yīng)用中藥復(fù)方血清藥理學(xué)的方法將自殺基因HSV1-tk/GCV系統(tǒng)與六味地黃丸在體外實(shí)驗(yàn)中聯(lián)合，以大鼠肝癌細(xì)胞CBRH7919為對(duì)象進(jìn)行了初步研究。通過(guò)研究以期為臨床自殺基因療法聯(lián)合中藥復(fù)方的中西醫(yī)

3、結(jié)合治療方案的建立提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、科學(xué)依據(jù)及前期工作基礎(chǔ)。 目的：本實(shí)驗(yàn)旨在以往研究的基礎(chǔ)上，應(yīng)用中藥復(fù)方血清藥理學(xué)方法將六昧地黃丸和HSV1-tk/GCV系統(tǒng)聯(lián)合，進(jìn)行大鼠肝癌細(xì)胞CBRH7919自殺基因治療的體外實(shí)驗(yàn)。初步探討其機(jī)制，為建立中西醫(yī)結(jié)合腫瘤基因治療方案提供必要條件。 方法： 1.六味地黃丸藥物血清和空白血清的制備：SD大鼠(230～280g)，分為對(duì)照組和六味地黃丸給藥組(藥物劑量為等效劑量的6～

4、8倍)。灌胃又分為四天血清組和八天血清組。末次給藥后1小時(shí)腹主動(dòng)脈取血，-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?2. HSV1-tk/GCV自殺基因系統(tǒng)的構(gòu)建(導(dǎo)師課題組在前期工作中已經(jīng)完成) 3. HSV1-tk/GCV系統(tǒng)聯(lián)合六味地黃丸含藥血清治療療效觀(guān)察：MTT法檢測(cè)大鼠肝癌細(xì)胞CBRH7919對(duì)GCV的敏感性以及對(duì)大鼠血清(對(duì)照血清和六味地黃丸含藥血清)的敏感程度，以確定用藥濃度。選擇對(duì)細(xì)胞抑制率低的濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。用金正鈞Q值分

5、析六味地黃丸含藥血清與自殺基因系統(tǒng)聯(lián)合作用對(duì)旁殺傷效應(yīng)是否具有協(xié)同性。Q值為聯(lián)合用藥時(shí)實(shí)測(cè)藥效與理論藥效的比值，Q<0.85為拮抗作用；0.85≤Q<1.15為相加作用；Q≥1.15為協(xié)同作用。 4.六味地黃丸含藥血清對(duì)自殺基因治療系統(tǒng)旁殺傷增效機(jī)制的研究：用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)凋亡指數(shù);SLDT法觀(guān)察六味地黃丸含藥血清對(duì)CBRH7919的GJIC功能的影響。 結(jié)論：本研究在細(xì)胞水平探討了六味地黃丸含藥血清增強(qiáng)自殺基因療法療