氯苯甲烷銨和噻嗎心胺對人晶狀體上皮細(xì)胞損傷作用的比較研究.pdf

1、通過體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞株(SRA01/04)，加入不同濃度的氯苯甲烷銨和噻嗎心胺，探討它們對人晶狀體上皮細(xì)胞的損傷及刺激細(xì)胞分泌炎性介質(zhì)的作用。 材料和方法 體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞株(SRA01/04)于含10％小牛血清的DMEM培養(yǎng)基中至細(xì)胞長滿融合，胰酶消化后均勻種在六孔板中。將噻嗎心胺和氯苯甲烷銨分別配制為0.5％和0.01％(均為噻嗎心胺眼液中所使用濃度)，然后將其稀釋為不同濃度：噻嗎心胺稀釋10倍、20

2、倍、30倍、60倍和100倍；氯苯甲烷銨稀釋100倍、200倍、300倍、600倍和1000倍。將上述不同稀釋倍數(shù)的噻嗎心胺和氯苯甲烷銨逐一加入六孔板中作用于人晶狀體上皮細(xì)胞，每種濃度作用3孔細(xì)胞，余3孔細(xì)胞不加任何藥物設(shè)為正常對照組。孵育48小時(shí)后顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的改變并離心提取細(xì)胞上清液，濃縮凍成干粉狀，加少量DMEM培養(yǎng)基將其溶解，再做酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbentassay，ELJS

3、A)檢測上清液中所含白介素-1α(interleukin 1 α，IL-lα)和前列腺素E<,2>(prostaglandin E2，PGE<,2>)的濃度并與正常對照組比較，以了解藥物對細(xì)胞毒性作用的差異；同樣，將SRAOl/04均勻種在96孔板中，滴加不同稀釋倍數(shù)的噻嗎心胺和氯苯甲烷銨，孵育48小時(shí)后用MTT還原測定法(Mono-nuclear cell direc cytotoxicity assay，MTT)檢測細(xì)胞活性。

4、 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，0.01％的氯苯甲烷銨和0.5％的噻嗎心胺作用人晶狀體上皮細(xì)胞24小時(shí)后，前者導(dǎo)致細(xì)胞全部死亡，后者尚有部分細(xì)胞存活；48小時(shí)后兩者作用的細(xì)胞大部分脫壁；在同樣稀釋100倍的情況下，氯苯甲烷銨作用的細(xì)胞72小時(shí)后部分脫壁死亡，而噻嗎心胺作用的細(xì)胞形態(tài)大小正常，且可見細(xì)胞分裂增殖。藥物作用細(xì)胞48小時(shí)后提取上清液行ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，細(xì)胞分泌PGE<,2>和IL-1α的量取決于藥物作用的濃度

5、：噻嗎心胺在高濃度時(shí)對細(xì)胞有直接殺傷作用，稀釋20倍時(shí)對細(xì)胞的炎性刺激作用最強(qiáng)(P<0.05)，當(dāng)濃度逐漸降低時(shí)，對細(xì)胞的毒性作用隨之減弱；而氯苯甲烷銨在高濃度時(shí)直接導(dǎo)致細(xì)胞死亡，隨著稀釋倍數(shù)增加，細(xì)胞存活率升高，但對細(xì)胞的作用轉(zhuǎn)變?yōu)槁匝仔源碳?，即使在稀?000倍的情況下刺激細(xì)胞分泌炎性介質(zhì)的量也明顯高于正常對照組(P<0.05)。 結(jié)論 氯苯甲烷銨作為噻嗎心胺眼液的防腐劑，是對人晶狀體上皮細(xì)胞造成損傷并刺激其強(qiáng)烈分