益氣逐瘀利水方促進(jìn)腰椎間盤突出后重吸收的細(xì)胞學(xué)研究及機(jī)理探討.pdf

1、目的:通過體外培養(yǎng)人腰椎間盤突出退變髓核細(xì)胞,觀察益氣逐瘀利水方對人破裂型與非破裂型退變髓核細(xì)胞凋亡、II型膠原(Col-II)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP-1)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的影響;并進(jìn)一步通過人巨噬細(xì)胞與人退變髓核細(xì)胞的共培養(yǎng),模擬體內(nèi)內(nèi)環(huán)境,觀察益氣逐瘀利水方對共培養(yǎng)細(xì)胞 Col-II、TIMP-1、Aggrecan的影響,探討重吸收的分子機(jī)制,以進(jìn)一步研究益氣逐瘀利水方促進(jìn)腰椎間盤突出后重吸收的機(jī)理。<

2、br>　　方法:(1)獲取6例人突出腰椎間盤髓核組織,其中破裂型、非破裂型各3例,進(jìn)行組織塊培養(yǎng)法體外培養(yǎng),同時(shí)利用SD大鼠提取含藥血清,分為實(shí)驗(yàn)組、低劑量組、中劑量組及高劑量組,利用流式細(xì)胞儀,檢測益氣逐瘀利水方對人退變髓核細(xì)胞凋亡的影響。(2)將實(shí)驗(yàn)組分為中劑量組及高劑量組,利用RealtimePCR、ELISA檢測益氣逐瘀利水方對人退變髓核細(xì)胞Col-II、TIMP-1、Aggrecan mRNA及蛋白的影響。(3)將人巨噬細(xì)胞與

3、人退變髓核細(xì)胞按1:3共培養(yǎng)后,分組為DMEM組、生理鹽水對照組、低劑量組、中劑量組及高劑量組,利用 RealtimePCR、ELISA檢測益氣逐瘀利水方對共培養(yǎng)細(xì)胞 Col-II、TIMP-1、Aggrecan mRNA及蛋白的影響。
　　結(jié)果:(1)中、高劑量組益氣逐瘀利水方均可有效促進(jìn)人破裂型及非破裂型退變髓核細(xì)胞的凋亡。(2)中劑量組益氣逐瘀利水方可上調(diào)非破裂型退變髓核細(xì)胞 Aggrecan mRNA、破裂型退變髓核細(xì)胞

4、Col-II、Aggrecan蛋白的表達(dá);高劑量組益氣逐瘀利水方可上調(diào)破裂型及非破裂型Col-II mRNA及蛋白表達(dá),破裂型退變髓核細(xì)胞Aggrecan mRNA、非破裂型Aggracan蛋白的表達(dá)。未檢測出對TIMP-1表達(dá)的影響。(3)成功將人巨噬細(xì)胞與人退變髓核細(xì)胞共培養(yǎng),高劑量的益氣逐瘀利水方抑制破裂型共培養(yǎng)細(xì)胞Col-II、Aggrecan、TIMP-1 mRNA及蛋白的表達(dá),同時(shí)抑制非破裂型共培養(yǎng)細(xì)胞Col-II mRNA

5、、Aggrecan蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論:(1)益氣逐瘀利水方能促進(jìn)人破裂型及非破裂型退變髓核細(xì)胞凋亡,使突出變性組織變小利于重吸收。(2)益氣逐瘀利水方能夠通過改善退變腰椎間盤細(xì)胞的膠原和蛋白聚糖變化,防止變性椎間盤進(jìn)一步退變突出。(3)通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞對退變髓核組織 Col-II、Aggrecan的分解,利于變性髓核的重吸收。此外同時(shí)發(fā)現(xiàn),益氣逐瘀利水方能抑制破裂型退變髓核細(xì)胞 TIMP-1的表達(dá),提示可能刺激 MMPs發(fā)揮降

6、解作用,加速變性髓核細(xì)胞基質(zhì)的分解。基于以上研究結(jié)論,最終得出益氣逐瘀利水方首先能促進(jìn)腰椎間盤突出退變髓核細(xì)胞的凋亡,使變性的椎間盤細(xì)胞喪失殆盡而利于重吸收;其次,通過促進(jìn)Col-II及 Aggrecan的表達(dá),修復(fù)退變髓核組織并緩解進(jìn)一步退變;最后,通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞對退變髓核組織Col-II、Aggrecan的分解,利于變性髓核的重吸收。此外同時(shí)發(fā)現(xiàn),益氣逐瘀利水方能抑制破裂型退變髓核細(xì)胞 TIMP-1的表達(dá),提示可能刺激MMPs發(fā)揮