雌激素調(diào)控骨代謝的分子機理及長期低劑量HRT對絕經(jīng)后婦女的腦保護作用.pdf

1、本實驗主要觀察了雌激素長時程作用后的促成骨作用和抗成骨細胞的凋亡作用及上述過程中MAPK信號通路的改變。此外，從AD易感基因型的角度，探討了長期低劑量HRT對絕經(jīng)后婦女的腦保護作用。 一、雌激素調(diào)控骨代謝過程的分子機理。 1.雌激素長時程作用對人的類成骨細胞TE85成骨作用的影響及其分子機制。 1.1 E2(0.1，1.0，10nmol/L)作用于TE85細胞14天，三個劑量都能劑量依賴性地增加細胞增殖活力，ER

2、s特異性拮抗劑ICI(0.1nmol/L)與E2(0.1nmol/L)合用，則細胞增殖活力無明顯改變，合用后ICI能明顯降低由于E2作用導致的細胞增殖活力的升高。說明E2能夠促進TE85細胞增殖活力，而此作用是通過雌激素受體介導的。 1.2 E2(0.1，1.0，10nmol/L)作用于TE85細胞14天，三個劑量都能劑量依賴性地增加細胞3H.胸腺嘧啶摻入量，ICI(0.1nmol/L)與2(0.1mol/L)合用，則細胞<'3

3、>H-胸腺嘧啶摻入量無明顯改變，合用后ICI能明顯降低由于E2作用導致的細胞<'3>H-胸腺嘧啶摻入量升高。說明E2通過受體途徑促進TE85細胞DNA合成增加，進而促進TE85細胞增殖。 1.3 E2(0.1，1.0，10nmol/L)作用于TE85細胞14天，三個劑量都能劑量依賴性地增加細胞鈣攝取，ICI(0.1nmol/L)與E2(0.1nmol/L)合用，則細胞鈣攝取量無明顯改變，合用后ICI能明顯降低由于E2作用導致的細

4、胞鈣攝取量升高。說明E2通過受體途徑促進TE85細胞攝取細胞外鈣，有利于細胞間質(zhì)發(fā)生礦化。 1.4 E2(1nmol/L)長時程作用14天后，細胞間質(zhì)礦化面積明顯增大，但ICI(1nmol/L)與E2(1nmol/L)合用后，礦化面積明顯減小。說明E2促進TE85細胞分泌間質(zhì)礦化的機理并不完全是通過受體途徑介導的。 1.5在E2(1.0nmol/L)作用于TE85細胞24小時后，p-ERK1/2的表達達到42％，而此后持

5、續(xù)作用的6天和12天其表達量維持在20％左右。對照組的p-ERK1/2在6小時和12天的表達量則接近為零。說明E2通過使MAPK信號通路中的ERK發(fā)生磷酸化，激活了導致細胞增殖的信號通路，從而促進TE85細胞的增殖。 2.17-β雌二醇對脂多糖誘導的大鼠原代成骨細胞凋亡的影響。 2.1 LPS(10μg/ml)作用于原代成骨細胞72小時后能顯著性的誘導細胞發(fā)生凋亡；而在LPS誘導細胞凋亡的同時加入E2(0.1，1.0，1

6、0nmol/L)作用72小時后，能顯著的抑止LPS誘導的這種細胞的凋亡，三個劑量組都能劑量依賴性地降低細胞凋亡率；ICI(0.1nmol/L)與E2(0.1nmol/L)合用，細胞凋亡率與單用E2(0.1nmol/L)組相比無明顯差異。說明E2能夠保護成骨細胞不被LPS誘導出現(xiàn)凋亡，而其作用并不是通過雌激素受體途徑來實現(xiàn)的。 2.2 LPS能夠?qū)е麓笫笤晒羌毎l(fā)生明顯的凋亡，特別是誘導成骨細胞細胞出現(xiàn)早期凋亡增加明顯；E2則

7、能顯著的抑制LPS誘導的早期細胞的凋亡，而對于晚期凋亡和死亡細胞則沒有明顯影響。說明E2能夠保護成骨細胞在LPS誘導下不發(fā)生早期凋亡。 2.3 LPS持續(xù)作用會導致原代成骨細胞的Caspase-3、P38、JNK磷酸化表達與升高，E2則能使得這種磷酸化的Caspase-3、P38、JNK表達明顯減少，而ICI則能部分遏制E2減少磷酸化Caspase-3、P38、JNK表達的作用。說明LPS是通過Caspase-3、P38、JNK

8、磷酸化途徑誘導細胞發(fā)生凋亡，而E2抑制這些信號分子表達的作用部分是由ER介導的。 二、長期低劑量HRT對絕經(jīng)后婦女腦海馬的影響。 1.在各個年齡段，HRT。組血漿雌二醇水平比對照組都有顯著的升高(P<0.05)。而血漿中孕酮和睪酮水平在各個年齡段無顯著差異。說明HRT使血漿雌二醇水平維持在生理濃度(>20 pg/ml)。而對照組血漿雌二醇水平則在各個年齡段皆低于牛理最低血漿雌二醇濃度20 pg/ml。 2.HRT

9、、組外周血小板膜上的PBR水平在各年齡段均高于對照組。同時還觀察到受試者血中PBR水平與E<,2>水平呈明顯相關性。說明雌激素水平接近于正常生理濃度時，將減輕內(nèi)分泌失衡導致的慢性應激過程。 3.HRT組共檢測出三種apoE等位基因型：ε3/ε3：61例，ε3/ε4：15例，ε2/ε3：7例；對照組共檢測出五種apoE等位基因型：ε3/e3：71例，ε3/ε4：14例，ε2/ε3：12例ε2/ε4：1例，ε4/ε4：1例。HRT和

10、對照組之間apoE基因型都是以e3/e3型為主，且基因型分布無明顯差異，HRT和對照組之間apoE等位基因分布無明顯差異。另外，HRT組的ERα等位基因型分布為：ppxx：30例，ppXx：6例，PPxx：2例，PPXx：4例，PPXX：3例，Ppxx：20例，PpXx：17例。PpXX：1例；對照組ERα的等位基因型分布為：ppxx：35例，ppXx：1例，PPxx：6例，PPXx：5例，PPXX：4例，Ppxx：27例，PpXx：1

11、7例，PpXX：3例。HRT和對照組之間ERa基因型分布無明顯差異，HRT和對照組之間ERα等位基因分布也無明顯差異。 4.在相同.AD易感apoE(ε3/ε4)基因型條件下，HRT組受試者海馬體積占全腦容積的百分比明顯高于對照組(P<0.05)。而在相同的AD易感ERα基因型條件下，HRT、組受試者海馬體積占全腦容積的百分比只是略高于對照組，但無統(tǒng)計學顯著差異。說明長期低劑量HRT、可以保護AD危險因子持有者腦海馬組織，減緩其