氯化錳長(zhǎng)期低劑量染毒對(duì)大鼠子代生精細(xì)胞的影響及其作用機(jī)理.pdf

1、目的：通過(guò)親代雌性 SD大鼠長(zhǎng)期低劑量錳染毒，觀察其對(duì)子代雄性大鼠生精細(xì)胞的影響。
　　方法：雌性SD大鼠（體重90-120 g）32只隨機(jī)分為對(duì)照組、2 mg/kg、4 mg/kg及8 mg/kg染錳組，8只/組。分別腹腔注射等容氯化錳（MnCl·4H2O）和生理鹽水（NS），5d/w，1次/d，共8w。后與正常雄性SD大鼠交配，通過(guò)陰道栓檢測(cè)確定孕期后持續(xù)染毒6w（妊娠期和哺乳期各3w）。取子代成熟期（8w齡）雄性SD大鼠睪丸

2、和血清做以下檢測(cè)：1.蘇木精-伊紅（HE）染色觀察睪丸結(jié)構(gòu)；2.Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)雄性子鼠睪丸凋亡相關(guān)基因OPA1、DRP1、Caspase9、Bim、FOXO3A的mRNA表達(dá)情況；3.免疫組化法和Western blot檢測(cè)上述凋亡相關(guān)蛋白定位和定量表達(dá)情況；4.化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)子代大鼠血清總睪酮含量；5.WST-1法檢測(cè)子代大鼠血清 SOD活力；6.可見(jiàn)光法檢測(cè)子代大鼠血清CAT活力；7.酶促反應(yīng)法檢測(cè)子代大鼠血清G

3、SH-Px活力。
　　結(jié)果：1.對(duì)照組睪丸曲細(xì)精管管腔大小基本一致、各級(jí)生精細(xì)胞有序排列，間質(zhì)正常無(wú)充血、出血及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；各染錳組睪丸組織結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)不同程度的形態(tài)學(xué)改變，且其程度隨染錳劑量增加而逐漸加重。
　　2.錳對(duì)大鼠子代睪丸生精細(xì)胞DRP1、Caspase9、Bim、FOXO3A表達(dá)的影響：與對(duì)照組相比，各染錳組DRP1、Caspase9、Bim、FOXO3A mRNA、免疫組化染色陽(yáng)性細(xì)胞率和蛋白相對(duì)表達(dá)量均較正常

4、組偏高（P<0.05），且各染錳組相比，隨染錳劑量的增加而增強(qiáng)（P<0.05）。
　　3.錳對(duì)大鼠子代睪丸生精細(xì)胞 OPA1的表達(dá)影響：與對(duì)照組相比，各染錳組 OPA1 mRNA、免疫組化染色陽(yáng)性細(xì)胞率和蛋白相對(duì)表達(dá)量均較正常組偏低（P<0.05），且各染錳組相比，隨染錳劑量的增加而減弱（P<0.05）。
　　4.錳對(duì)子代雄性大鼠血清總睪酮含量的影響：各染錳組較對(duì)照組相比均升高（P<0.05）,且各染錳組之間相比，隨染錳劑量

5、的增加而降低（P<0.05）。
　　5.錳對(duì)子代雄性大鼠血清抗氧化酶系統(tǒng)的影響：與對(duì)照組相比，各染錳組SOD、CAT和GSH-Px活力均降低（P<0.05），且各染錳組之間相比，隨染錳劑量的增加而降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：長(zhǎng)期低劑量染錳可通過(guò)胎盤屏障和血睪屏障進(jìn)入子代大鼠睪丸，引起生精細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致其生精障礙?？赡艿臋C(jī)制為：
　　1.作用于下丘腦-垂體-性腺軸，降低子代大鼠血清睪酮水平，引起精子發(fā)育的細(xì)胞周期阻