人外周血耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)及其DC-STAMP的表達(dá)研究.pdf

1、目的:誘導(dǎo)培養(yǎng)人外周血耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞（TolDCs）并動(dòng)態(tài)觀察TolDCs誘導(dǎo)過(guò)程樹(shù)突狀細(xì)胞-特異性跨膜蛋白(dendritic cells-specific transmembrane protein,DC-STAMP)mRNA的表達(dá)水平。
　　方法:（1）免疫磁珠分選法獲得人外周血CD14+單核細(xì)胞，采用細(xì)胞因子GM-CSF、IL-4、地塞米松和LPS聯(lián)合培養(yǎng)誘導(dǎo)TolDCs;（2）觀察培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)變化，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)C

2、D83、CD86和CD14的表達(dá)，并將培養(yǎng)的細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)觀察T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng);（3）采用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)TolDCs誘導(dǎo)培養(yǎng)過(guò)程中DC-STAMP mRNA表達(dá)水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察。
　　結(jié)果:（1）CD14+單核細(xì)胞經(jīng)粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子（Granulocyte-mac rop ha ge colony-stimulating factor，GM-CSF）、白介素-4（Interleukin-4，IL-4）、脂多糖（L

3、ipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)培養(yǎng)后胞體變大，出現(xiàn)樹(shù)枝狀突起，為典型的成熟DCs形態(tài)，加地塞米松磷酸鈉（Dexamethasone sodium phosphate，Dex）誘導(dǎo)培養(yǎng)后胞體亦變大，但未見(jiàn)明顯樹(shù)枝狀突起，缺乏典型的成熟DCs形態(tài);（2）CD14+單核細(xì)胞經(jīng)GM-CSF、IL-4培養(yǎng)后使CD83和CD86表達(dá)上調(diào)，CD14表達(dá)下調(diào)，加Dex聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)后DCs表面CD83、CD86表達(dá)下調(diào)、CD14表達(dá)上調(diào)