GAS7多克隆抗體的制備及雌激素對(duì)大鼠海馬GAS7表達(dá)的影響.pdf

1、GAS（生長休止蛋白）主要表達(dá)于細(xì)胞的休止期,調(diào)控細(xì)胞生長分化。其中GAS7首次發(fā)現(xiàn)于血清剝奪的鼠類成纖維細(xì)胞,在體內(nèi)主要表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng),且特異性地在極度分化的神經(jīng)細(xì)胞大量表達(dá)。GAS7對(duì)原代培養(yǎng)的小腦神經(jīng)細(xì)胞分化成熟是必需的,而且有研究表明GAS7在PC12細(xì)胞的高表達(dá)可以促進(jìn)PC12細(xì)胞突起的形成，而應(yīng)用反義寡核苷酸抑制GAS7在培養(yǎng)的小腦細(xì)胞的表達(dá)將顯著抑制細(xì)胞突起的形成，因此GAS7被認(rèn)為是成熟神經(jīng)細(xì)胞的標(biāo)志并具有潛在的抗癌功能

2、。近年來GAS7的功能已引起有關(guān)學(xué)者的重視，但現(xiàn)在尚未有商品化的抗體,而關(guān)于GAS7在體內(nèi)的表達(dá)定位及分布等相關(guān)資料尚有所欠缺。本研究主要制備抗GAS7抗血清及用免疫組織化學(xué)、Western blot和RT-PCR方法觀察大鼠神經(jīng)系統(tǒng)中GAS7的表達(dá)定位及分布及雌激素對(duì)大鼠海馬GAS7表達(dá)的影響,以期為研究GAS7在神經(jīng)系統(tǒng)的功能提供重要的實(shí)驗(yàn)資料。
　　 目的：
　　 1.利用GST融合蛋白作免疫原制備抗大鼠GAS7

3、多克隆抗血清。
　　 2.觀察大鼠神經(jīng)系統(tǒng)中GAS7不同異構(gòu)體的表達(dá)定位及分布。
　　 3.研究雌激素替代治療對(duì)大鼠海馬生長休止蛋白7表達(dá)的作用和影響。
　　 方法：
　　 1.利用基因工程重組的表達(dá)質(zhì)粒誘導(dǎo)表達(dá)的GST融合蛋白作免疫原制備抗大鼠GAS7多克隆抗血清。
　　 2.應(yīng)用免疫組織化學(xué)、Western blot和RT-PCR方法觀察大鼠神經(jīng)系統(tǒng)中GAS7的表達(dá)定位及分布。

4、　　 3.制作卵巢切除雌激素替代模型，以免疫組織化學(xué)，Western blot觀察雌激素對(duì)大鼠海馬GAS7表達(dá)的作用及影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.成功制備抗大鼠GAS7多克隆抗血清。
　　 2.GAS7廣泛表達(dá)于大鼠神經(jīng)系統(tǒng)，在不同的部位有不同的GAS7表達(dá)。
　　 3.雌激素上調(diào)GAS7b的表達(dá)，而下調(diào)GAS7a的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1.不同的GAS7蛋白可能參于