Neuropilin-1誘導(dǎo)口腔鱗狀細胞癌上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及其機制的研究.pdf

1、口腔鱗狀細胞癌（Oral squamous cell carcinoma，OSCC）是最常見的口腔惡性腫瘤，具有較強的局部浸潤和轉(zhuǎn)移能力，惡性程度往往較高。上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的影響。神經(jīng)纖毛素1(Neuropilin-1，NRP1)是一種多功能的跨膜糖蛋白，研究表明其表達程度與腫瘤的發(fā)生，生長和預(yù)后密切相關(guān)并且可能參與了某

2、些腫瘤細胞EMT的進程。NRP1誘導(dǎo)口腔鱗狀細胞癌發(fā)生EMT可能是其侵襲轉(zhuǎn)移性較強的重要原因。
　　目的：⑴觀察NRP1在口腔鱗癌中的表達，評價NRP1表達水平與口腔鱗癌臨床病理以及預(yù)后的關(guān)系。⑵明確NRP1上調(diào)后口腔鱗癌細胞EMT的發(fā)生及生物學(xué)行為的改變。⑶探討NRP-1誘導(dǎo)口腔鱗狀細胞癌發(fā)生EMT的分子生物學(xué)機制。
　　方法：①應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測60例口腔鱗狀細胞癌標本及30例正?？谇徽衬そM織標本中NRP1的

3、表達強度、范圍;統(tǒng)計分析NRP1表達水平與腫瘤臨床病理以及預(yù)后的關(guān)系。②利用pcDNA3.1-NRP1真核表達質(zhì)粒及pcDNA3.1空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人口腔鱗癌細胞系CAL27，HN4及HN6，獲得穩(wěn)定高表達NRP1的細胞株（實驗組）及相對低表達NRP1的細胞株（對照組）。觀察質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后兩組細胞的表型的改變;應(yīng)用RT-RCR和Western Blot方法分別檢測兩組細胞中NRP1以及上皮和間質(zhì)標志物mRNA水平和蛋白水平的表達變化;應(yīng)用劃痕實

4、驗、Transwell侵襲實驗、單克隆形成實驗、耐藥實驗檢測NRP1高表達后細胞生物學(xué)行為的改變。③應(yīng)用RT-RCR和Western Blot方法分別檢測兩組細胞中NF-κB信號通路相關(guān)蛋白的變化。特異性抑制NF-κB信號通路活性，觀察細胞的EMT進程能否被逆轉(zhuǎn)。
　　結(jié)果：⑴免疫組織化學(xué)染色顯示:60例口腔鱗狀細胞癌標本中均檢測出NRP1表達，而30例正常組織中僅6例檢測出NRP1表達，顯示NRP1在腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(p＜0

5、.001);NRP1的表達與口腔鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率密切相關(guān)(p＜0.05);生存分析表明NRP1高表達組總體生存率明顯低于低表達組患者(p＜0.05)。⑵NRP1高表達誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞系發(fā)生了明顯的EMT，表現(xiàn)為細胞形態(tài)學(xué)的改變，上皮標志物E-cadherin和β-catenin表達下降，間質(zhì)標志物vimentin和N-cadherin表達上升。細胞的遷移、侵襲、增殖能力以及耐藥性顯著增強，細胞發(fā)生EMT導(dǎo)致遷移侵襲性增強的同時獲得了一

6、定的腫瘤干細胞(cancer stemcell，CSC)樣特性。⑶NF-κB信號通路在NRP1誘導(dǎo)的口腔鱗癌細胞EMT進程中呈現(xiàn)激活狀態(tài)，特異性抑制NF-κB信號通路活性，可逆轉(zhuǎn)NRP1高表達腫瘤細胞的EMT進程，并減弱其遷移、侵襲能力。
　　結(jié)論：本實驗證明NRP1在口腔鱗狀細胞癌組織中呈高表達，與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率及患者的生存率密切相關(guān)。NRP1可通過激活NF-κB信號通路誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞發(fā)生EMT，增強其遷移侵襲能力的同時使