CXCR4調(diào)控口腔鱗狀細胞癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響腫瘤轉(zhuǎn)移的實驗研究.pdf

1、第一部分CXCR4、β-catenin及EMT相關(guān)因子在口腔鱗癌中的表達及與臨床病理的關(guān)系
　　 目的：
　　 檢測CXCR4、β-catenin及EMT相關(guān)因子在口腔鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組中表達的差別，探討它們與臨床病理特征之間的關(guān)系及CXCR4與β-catenin及EMT相關(guān)因子表達的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 應(yīng)用免疫組化SP法檢測CXCR4、β-catenin及EMT相關(guān)因子在60例口腔鱗癌

2、中的的表達，應(yīng)用x2或Fish確切概率法分析各指標(biāo)與口腔鱗癌患者臨床病理之間關(guān)系，Spearman相關(guān)性分析CXCR4與β-catenin及EMT相關(guān)因子的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1.CXCR4、N-cadherin、Twist、Snail在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組;而β-catenin、E-cadherin在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)組的表達低于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.C

3、XCR4及Twist在中、低分化中高表達，β-catenin的膜表達在T1期中高表達(P＜0.05)。
　　 3.β-catenin的表達與CXCR4呈負相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.497; Twist、Snail、N-cadherin的表達與CXCR4呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.256、0.300、0.333(P＜0.05)。
　　 結(jié)論
　　 EMT在口腔鱗癌的淋巴轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，CXCL12/CXCR4生

4、物學(xué)軸可能作用于EMT的某個環(huán)節(jié)，并調(diào)控其發(fā)生。
　　 第二部分CXCR4調(diào)控口腔鱗狀細胞癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響腫瘤轉(zhuǎn)移的體外實驗研究
　　 目的：
　　 利用RNAi技術(shù)沉默CXCR4在人舌癌細胞Tscca中的表達，觀察干擾后Tscca細胞遷移侵襲能力、凋亡及經(jīng)典Wnt通路主要蛋白表達情況的變化。
　　 方法：
　　 1.質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將CXCR4 siRNA轉(zhuǎn)染至Tscca細胞，用RT-PCR檢測si

5、RNA對CXCR4的抑制作用。
　　 2.應(yīng)用劃痕實驗觀察CXCR4基因沉默后Tscca細胞遷移能力的變化。
　　 3.應(yīng)用Transwell侵襲小室法觀察CXCR4基因沉默后Tscca細胞侵襲能力的變化。
　　 4.應(yīng)用Annexin V檢測CXCR4基因沉默后Tscca細胞凋亡情況。
　　 5.Western blot檢測CXCR4基因沉默后Tscca細胞中經(jīng)典Wnt信號通路中主要蛋白的表達情況。

6、r>　　 結(jié)果：
　　 1.RT-PCR結(jié)果證明siRNA對CXCR4的表達有明顯抑制作用(P＜0.05)。
　　 2.劃痕實驗證明CXCR4基因沉默后Tscca細胞遷移能力明顯下降。
　　 3.Transwell侵襲實驗證明CXCR4基因沉默后Tscca細胞侵襲能力明顯降低(P＜0.001)。
　　 4.Annexin V檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染CXCR4siRNA細胞凋亡率明顯升高(P＜0.05)。
　　

7、 5.Western blot發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染CXCR4 siRNA后細胞MMP-2、MMP-9和N-cadherin表達水平降低，而E-cadherin蛋白表達水平升高，(P＜0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 1.CXCR4基因沉默能夠抑制人舌鱗癌細胞Tscca的遷移侵襲能力，CXCR4在舌鱗癌轉(zhuǎn)移中起重要作用。
　　 2.CXCR4基因沉默能夠顯著抑制經(jīng)典Wnt通路中相關(guān)基因MMP-2、MMP-9和N-cadhe

8、rin的表達，而顯著提高E-cadherin的表達，CXCR4可通過調(diào)控經(jīng)典Wnt通路參與舌鱗癌EMT的發(fā)生。
　　 第三部分CXCR4調(diào)控口腔鱗狀細胞癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響腫瘤轉(zhuǎn)移的體內(nèi)實驗研究
　　 目的:
　　 探討轉(zhuǎn)染CXCR4siRNA的人舌鱗癌細胞Tscca對裸鼠種植性腫瘤生長抑制及經(jīng)典Wnt通路相關(guān)因子表達情況的影響。
　　 方法:
　　 1.建立裸鼠舌鱗癌皮下動物模型。
　　

9、2.瘤內(nèi)注射lipofectamine2000和CXCR4 siRNA混合物，動態(tài)觀察腫瘤生長情況，檢測經(jīng)典Wnt通通路成員等蛋白水平的表達變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.成功建立裸鼠舌鱗癌皮下動物模型。
　　 2.和對照組相較，CXCR4 siRNA治療組腫瘤生長抑制，腫瘤體積差別顯著;應(yīng)用免疫組化法檢測腫瘤標(biāo)本發(fā)現(xiàn)，CXCR4表達水平敲除后，MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表達水平降低，而E-