Notch-1信號(hào)的激活對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和生物學(xué)的影響.pdf

1、目的:
　　探討Notch-1信號(hào)通路對(duì) Eca-109-EMT的調(diào)控作用,明確激活 Notch-1信號(hào)通路后對(duì)Eca-109的增殖、凋亡、遷移能力的影響。
　　方法:
　　明確Notch-1信號(hào)通路調(diào)節(jié)食管鱗狀細(xì)胞癌EMT的作用機(jī)制,將實(shí)驗(yàn)分為Control、DMSO、MOCK、N1ICD、TGF-β1、DAPT+ TGF-β1、DAPT組,N1ICD慢病毒過(guò)表達(dá)載體(LV-N1ICD)轉(zhuǎn)染Eca-109上調(diào)Notc

2、h-1信號(hào)通路。72h后根據(jù)分組情況分別加入5ng/ml TGF-β1誘導(dǎo)Eca-109發(fā)生EMT和15μmol/mlDAPT抑制Eca-109發(fā)生 EMT,48h后CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力;Western–blotting檢測(cè)E-cadhenrin、Vimentin、Notch-1、Hes-1、Hey-1、Jagged-1蛋白的表達(dá)變化;5周后用結(jié)晶紫染液對(duì)克隆細(xì)胞進(jìn)行染色并計(jì)數(shù);觀察Eca-10924h內(nèi)遷移能力的變化;Annexin

3、V/PI對(duì)Eca-109染色并檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　1. CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力結(jié)果示: Eca-109在N1ICD組中增殖活力最強(qiáng),與Control組、MOCK組、TGF-β1、TGF-β1+DAPT、DMSO、DAPT組比較具有顯著性差異(P<0.05)。
　　2.細(xì)胞克隆計(jì)數(shù)結(jié)果示:N1ICD組與Control組、MOCK組、TGF-β1、DAPT+TGF-β1和 DMSO、DAPT組比較,Eca-

4、109克隆形成率及數(shù)量最多,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異比較明顯(P<0.05)。
　　3.劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示:N1ICD組與 Control組、MOCK組、TGF-β1、TGF-β1+DAPT和DMSO、DAPT組比較,Eca-109細(xì)胞劃痕愈合明顯,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯(P<0.05)。
　　4.細(xì)胞自動(dòng)分析和分選裝置檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果示:N1ICD組與Control組、MOCK組、TGF-β1、DAPT+TGF-β1和DMSO、DAPT組比較,E

5、ca-109細(xì)胞凋亡率顯著減少,有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　5. Western-blotting檢測(cè)結(jié)果顯示:在N1ICD組中,E-Cadherin蛋白表達(dá)量明顯減少,與Control組、MOCK組、TGF-β1、DAPT、DAPT+TGF-β1和DMSO組比較有顯著性差異(P<0.05); Vimentin、Notch-1、Hes-1、Hey-1、Jagged-1等蛋白表達(dá)量明顯增多,與Control組、MOCK