馬流感病毒感染貓的致病模型建立及免疫組織化學(xué)病原檢測(cè).pdf

1、近年來(lái)，伴侶動(dòng)物的日益增多，犬貓飼養(yǎng)量的不斷增大，雖然提高了人們的生活質(zhì)量，促進(jìn)社會(huì)和諧，但是也帶來(lái)了一些潛在的疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)。2004年美國(guó)首次報(bào)道犬感染流感病毒，是由賽馬將H3N8亞型馬流感病毒傳播至賽犬，之后在歐美多個(gè)國(guó)家的寵物犬中流行，引起了廣泛關(guān)注。隨后，韓國(guó)和我國(guó)南方地區(qū)均發(fā)現(xiàn)H3N2亞型流感病毒感染犬，并且表現(xiàn)出流感病毒的典型癥狀。不但如此，近年來(lái)研究報(bào)道表明貓可以感染 H5N1、H9N2、H7N7、H3N2、H1N1等多種

2、亞型流感病毒。并且 H5N1可以在貓群中水平傳播，這為流感病毒的傳播和復(fù)制提供了有利的條件。流感病毒之所以可以跨宿主傳播，其重要原因在于血凝素和神經(jīng)氨酸酶與細(xì)胞受體的糖蛋白為糖鏈的唾液酸的特異性結(jié)合。貓的呼吸系統(tǒng)也都具有SAα-2,3 Gal（禽流感病毒）和SAα-2,6 Gal（人流感病毒）受體。同時(shí)具備兩種受體很有可能成為流感病毒的混合宿主，為流感病毒的重組和傳播提供條件。
　　美國(guó)流行的犬流感病毒與H3N8亞型馬流感病毒的H

3、A基因存在若干氨基酸的突變，這些突變表明H3N8亞型流感病毒已經(jīng)在犬群中逐漸形成具有傳播能力的單獨(dú)分支，可在犬體內(nèi)有效復(fù)制，并水平傳播至其他犬。為了確定這種情況是否會(huì)在貓群中發(fā)生，本研究通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)貓進(jìn)行人工滴鼻感染 H3N8亞型馬流感病毒A/equine/Heilongjiang/SS1/2013（H3N8）對(duì)其復(fù)制和致病能力進(jìn)行研究，并對(duì)同居組實(shí)驗(yàn)貓進(jìn)行臨床癥狀和病毒復(fù)制能力的檢測(cè)，研究其在貓群中的水平傳播能力。本實(shí)驗(yàn)采取滴鼻感染途徑

4、，對(duì)9-12周齡實(shí)驗(yàn)貓進(jìn)行感染實(shí)驗(yàn)，并同時(shí)設(shè)置同居組和空白對(duì)照組。連續(xù)檢測(cè)滴鼻組和同居組實(shí)驗(yàn)貓的體溫、臨床表現(xiàn)。按期采集3組實(shí)驗(yàn)貓鼻拭子，對(duì)其排毒情況進(jìn)行監(jiān)測(cè),按期采集3組實(shí)驗(yàn)貓血清樣本和組織樣本。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，滴鼻組和同居組實(shí)驗(yàn)貓的體溫均表現(xiàn)出不同程度的升高，并出現(xiàn)噴嚏、咳嗽、精神沉郁、食欲不振等流感病毒癥狀。人工感染組貓?jiān)诟腥竞蟮牡?～5d均可以從鼻咽拭子中檢測(cè)到病毒，同居組的試驗(yàn)貓于感染后的5-7d可以從鼻咽拭子中檢測(cè)

5、到病毒。人工感染組貓?jiān)诟腥竞蟮牡?～5d均可以從鼻咽拭子中檢測(cè)到病毒，同居組的試驗(yàn)貓于感染后的5-7d可以從鼻咽拭子中檢測(cè)到病毒，同居組實(shí)驗(yàn)貓第7d的病毒滴度與人工感染組第5d病毒滴度相似。于攻毒后5d和7d對(duì)實(shí)驗(yàn)貓進(jìn)行安樂(lè)死，采取各組織器官，結(jié)果表明，僅在肺臟、氣管和鼻甲中檢測(cè)到病毒，其他組織器官中均未分離到病毒。對(duì)實(shí)驗(yàn)貓的肺臟、氣管和鼻甲進(jìn)行病理組織學(xué)研究，結(jié)果顯示，無(wú)論是滴鼻組和同居組均出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病變，但同居組較輕微。免疫

6、組織化學(xué)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，流感病毒抗原表達(dá)主要出現(xiàn)在氣管和肺臟。滴鼻組和同居組的肺臟均呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。
　　本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，H3N8亞型馬流感病毒可以通過(guò)滴鼻方式感染家貓，并且能夠在實(shí)驗(yàn)貓之間水平傳播。滴鼻組和同居組均表現(xiàn)出臨床癥狀、排毒，并在呼吸道的檢測(cè)到病毒復(fù)制。本實(shí)驗(yàn)初步建立了H3N8亞型馬流感病毒感染貓的動(dòng)物模型，為貓流感的研究建立了一定的基礎(chǔ)，為馬流感病毒的傳播性和致病力提供了依據(jù)。對(duì)馬流感病毒的跨宿主傳播有重要意義，對(duì)流感病