頸7神經(jīng)根切斷后靶肌肉運(yùn)動(dòng)終板形態(tài)和功能學(xué)研究.pdf

1、第一部分：SFMEG用于頸7神經(jīng)根切斷后運(yùn)動(dòng)終板功能變化的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：運(yùn)用刺激性單纖維肌電圖(sSFMEG)對(duì)肌肉內(nèi)運(yùn)動(dòng)終板功能變化進(jìn)行細(xì)胞水平的研究，來探索頸7神經(jīng)根切斷后的代償過程和可能機(jī)制。
　　方法：36只雄性SD大鼠，隨機(jī)分成7組，每組6只。右側(cè)建成頸7神經(jīng)根切斷模型，左側(cè)為正常對(duì)照組。用sSFMEG檢測(cè)術(shù)后第1、2、4、6、8、12周內(nèi)肱三頭肌、背闊肌和伸指總肌(頸7神經(jīng)根主要支配肌肉)的顫抖(Jitte

2、r)和肌纖維密度(FD)變化。所有數(shù)據(jù)收集后，用SPSS17.0軟件進(jìn)行均值、標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算和方差統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：通過對(duì)正常SD大鼠418條肌纖維的檢測(cè)，正常Jitter值范圍為16.0±19.2μs(MD±3SD)。在術(shù)后1-6周內(nèi)，有超過10％的Jitter直超過正常范圍，在第2、4、6周時(shí)實(shí)驗(yàn)側(cè)靶肌肉內(nèi)MCD比對(duì)照側(cè)增高有顯著性差異(P<0.05)。僅在術(shù)后第4周和6周可很少次數(shù)遇見阻滯。FD值在術(shù)后也逐漸增高，但8周和

3、12周后Jitter值恢復(fù)到正常水平，F(xiàn)D值仍繼續(xù)高于對(duì)照側(cè)。
　　結(jié)論：在SD大鼠可獲得穩(wěn)定、可靠的Jitter和FD值。SFMEG證實(shí)頸7神經(jīng)根切斷術(shù)后，第1-6周運(yùn)動(dòng)終板功能下降，到第12周基本恢復(fù)正常。
　　第二部分：頸7神經(jīng)根切斷后靶肌肉內(nèi)AChRγ/ε亞基表達(dá)變化
　　目的：用SYBRGreenⅠ熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)方法，研究頸7神經(jīng)根切斷后靶肌肉內(nèi)乙酰膽堿受體γ-和ε-亞基的mRNA表達(dá)水平的變化，結(jié)合用

4、WesternBlot檢測(cè)同期agrin蛋白表達(dá)變化，來探索頸7神經(jīng)根切斷后的代償過程。
　　方法：42只雄性SD大鼠，隨機(jī)分成7組，每組6只。右側(cè)建成頸7神經(jīng)根切斷模型，左側(cè)為正常對(duì)照組。用SYBRGreenⅠ熒光定量RT-PCR方法，檢測(cè)正常對(duì)照組及術(shù)后第1、2、4、6、8、12周組肱三頭肌、背闊肌和伸指總肌內(nèi)乙酰膽堿受體γ-、ε-和α-亞基的mRNA表達(dá)水平的變化曲線。用Western Blot檢測(cè)正常對(duì)照組及術(shù)后第1、2、

5、4、6、8、12周組同樣三塊靶肌肉內(nèi)agrin蛋白表達(dá)水平。所有數(shù)據(jù)收集后，用SPSS17.0軟件進(jìn)行均值、標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算和方差統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：ε-AchR的mRNA在頸7神經(jīng)根切斷術(shù)后第1～6周下調(diào)表達(dá)(P<0.05)，第6周下降到谷底，在第12周基本恢復(fù)到正常對(duì)照組水平。γ-AchR的mRNA表達(dá)在頸7神經(jīng)根切斷術(shù)后第1周就開始上升，到第6周達(dá)頂峰(P<0.05)，在第12周下降至正常水平。術(shù)后第1-6周的agrin蛋白表

6、達(dá)明顯高于正常對(duì)照組水平(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；術(shù)后第8-12周的agrin蛋白表達(dá)恢復(fù)到正常水平。相同組別的肱三頭肌、背闊肌和伸指總肌內(nèi)γ-/ε-AchR的mRNA比值，agrin蛋白表達(dá)基本相同(P>0.05)。
　　結(jié)論：運(yùn)用SYBRGreenⅠ熒光RT-PCR技術(shù)和WesternBlot檢測(cè)，證實(shí)在SD大鼠頸7神經(jīng)根切斷后第1～6周內(nèi)，其靶肌肉內(nèi)γ-/ε-AChR會(huì)出現(xiàn)失神經(jīng)的轉(zhuǎn)換，agrin蛋白表達(dá)升高，但在第1

7、2周左右恢復(fù)正常。
　　第三部分：頸7神經(jīng)根切斷后靶肌肉運(yùn)動(dòng)終板形態(tài)變化
　　目的：通過運(yùn)用乙酰膽堿酯酶染色、銀-乙酰膽堿酯酶染色，免疫熒光染色和電鏡等多種手段，研究頸7神經(jīng)根切斷后主要靶肌肉內(nèi)運(yùn)動(dòng)終板形態(tài)學(xué)變化過程，來探索頸7神經(jīng)根切斷術(shù)后的代償機(jī)制，以將來進(jìn)一步判斷頸7神經(jīng)根功能。
　　方法：42只雄性SD大鼠，隨機(jī)分成7組，每組6只。右側(cè)建成頸7神經(jīng)根切斷模型，左側(cè)為正常對(duì)照組。用乙酰膽堿酯酶染色、銀.乙酰膽堿酯

8、酶染色，免疫熒光染色和電鏡等技術(shù)手段檢測(cè)術(shù)后第1、2、4、6、8、12周的肱三頭肌、背闊肌和伸指總肌(頸7神經(jīng)根主要支配肌肉)內(nèi)運(yùn)動(dòng)終板形態(tài)學(xué)變化過程。所有數(shù)據(jù)收集后，用SPSS17.0軟件進(jìn)行均值、標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算和方差統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：頸7神經(jīng)根切斷后第1周～第3周，主要靶肌肉內(nèi)運(yùn)動(dòng)終板的形態(tài)結(jié)構(gòu)無明顯變化。頸7神經(jīng)根切斷后第4周～第8周，靶肌肉內(nèi)某些區(qū)域出現(xiàn)少數(shù)面積明顯增大，乙酰膽堿酯酶明顯淡染，電鏡下超微結(jié)構(gòu)嚴(yán)重退變的運(yùn)動(dòng)