硼替佐米在肺動(dòng)脈高壓大鼠模型中的實(shí)驗(yàn)性及機(jī)制性研究.pdf

1、背景與目的：先天性心臟缺陷引起的肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hyper(-)tension，PAH)是臨床常見(jiàn)疾病，以持續(xù)增高的肺動(dòng)脈壓并最終導(dǎo)致患兒右心衰竭和過(guò)早死亡為特點(diǎn)。肺動(dòng)脈高壓最基本的病理特征是肺小動(dòng)脈血管重構(gòu)，主要表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡失衡及細(xì)胞外基質(zhì)過(guò)度沉積等。近年來(lái)的研究表明硼替佐米(bortezomib，velcade，PS-341)可以遏制或者部分改善高肺血流性肺動(dòng)脈高壓引

2、起的肺小動(dòng)脈血管重構(gòu)，但具體的機(jī)制仍未完全清楚。因此我們從基因和分子水平進(jìn)行深入的研究，闡明肺動(dòng)脈高壓發(fā)病的具體機(jī)制，為臨床治療肺動(dòng)脈高壓提供理論依據(jù)，并進(jìn)一步尋求根治肺動(dòng)脈高壓的有效方法。
　　 在本研究中，我們認(rèn)為肺動(dòng)脈高壓的形成機(jī)制涉及多種因子，比如核因子kappa B(nuclear factor-κB，NF-κB)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factorbeta-β, TGF-β1)/S

3、mads(drosophila mothers against decapentaplegic protein)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等。我們的目的是觀察硼替佐米是否可以改善高肺血流性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的肺小動(dòng)脈血管重構(gòu)及其引起的肺臟和心臟的損傷，并進(jìn)一步探討NF-κB、TGF-β1/Smads及VEGF信號(hào)通路在硼替佐米影響高肺血流性肺動(dòng)脈高壓形成過(guò)程中的作

4、用機(jī)制。
　　 方法：采用腹主動(dòng)脈-下腔靜脈造瘺術(shù)(aorto-caval shunt method，ACS)的方法建立高肺血流性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型。術(shù)后3天分別給予硼替佐米（50ugkg-1，2次/周，8周）或等體積的生理鹽水。至此48只Wistar大鼠隨機(jī)分為4組（n=12/組）:Ⅰ:假手術(shù)組;Ⅱ:分流組;Ⅲ:分流+生理鹽水組;Ⅳ:分流+硼替佐米組。術(shù)后第8周測(cè)量并計(jì)算心率(HR)，中心靜脈壓(CVP)，右心室收縮壓(RVS

5、P)，平均右心室壓(MRVP)及右心室肥厚指數(shù)(RVHI)，并對(duì)右心室的損傷程度進(jìn)行評(píng)估。采用HE及Massion染色法觀察肺動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變，計(jì)算WT％及WA％。采用免疫組化法、Western Blot法檢測(cè)肺組織中NF-κB，I-κBα，TGFβ1，Smad2/3和VEGF的蛋白表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)分析法檢測(cè)各組大鼠肺組織中Ubiquitin(Ub)，TGF-β1，Smad2，Smad3和VEGF的mRNA表達(dá)水平

6、。
　　 結(jié)果：與假手術(shù)組相比，分流組及分流+生理鹽水組的大鼠肺小動(dòng)脈管壁明顯增厚、官腔狹窄，甚至閉塞，RVSP、MRVP、RVHI及WT％、WA％增高(P＜0.05）。與此同時(shí)，免疫組化、Western Blot和RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示肺組織中Ub、NF-κB、TGF-β1、Smad2、Smad3和VEGF的表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05），而I-κBα表達(dá)減弱。與分流組相比，硼替佐米明顯改善了大鼠的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，減輕了大鼠右心室