綿羊妊娠早期骨髓表達(dá)ISG15和PIBF的研究.pdf

1、免疫器官由中樞免疫器官和周?chē)庖咂鞴賰刹糠纸M成，其中中樞免疫器官包括骨髓和胸腺。骨髓是 T淋巴細(xì)胞的出生地，骨髓的重要功能就是生成各種細(xì)胞的干細(xì)胞，這些干細(xì)胞通過(guò)分化再生成各種血細(xì)胞如紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等，因此，骨髓不但是造血器官，對(duì)于維持機(jī)體的生命和免疫力也非常重要。為探索綿羊妊娠早期對(duì)中樞免疫器官骨髓的影響，本試驗(yàn)以繁殖機(jī)能正常的綿羊?yàn)樵囼?yàn)動(dòng)物，研究妊娠早期綿羊骨髓表達(dá)ISG15和PIBF因子的的變化規(guī)律。首先對(duì)綿羊埋植孕激素海

2、綿栓，進(jìn)行同期發(fā)情處理，進(jìn)而試情并配種（對(duì)照組不配種）。然后采集發(fā)情后第16天未配種的，以及配種后第13、16和25天妊娠的綿羊骨髓（通過(guò)屠宰解剖，確定配種后第13、16和25天妊娠的綿羊，即看到孕體的存在）。將不同妊娠天數(shù)的骨髓分別置于2mL冷凍管中保存在-196℃液氮中，帶回實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)mRNA的表達(dá)和蛋白印跡分析。另外采集不同妊娠天數(shù)的綿羊骨髓，用PBS液沖洗后將骨髓塊放入4％多聚甲醛的PBS溶液中固定，用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)。得到了

3、如下結(jié)果：
　　1、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)和蛋白印跡分析發(fā)現(xiàn)，妊娠早期綿羊骨髓中的ISG15 mRNA和蛋白的表達(dá)量從未妊娠到妊娠期逐漸升高，ISG15 mRNA和蛋白在妊娠16天羊骨髓中的表達(dá)量高于未妊娠16天，妊娠13天和妊娠25天。而且在妊娠16天表達(dá)量達(dá)最高。然后，到妊娠25天表達(dá)量則會(huì)逐漸降低。通過(guò)免疫組織化學(xué)檢測(cè)確認(rèn)，ISG15蛋白在妊娠16天羊骨髓中的染色強(qiáng)度高于未妊娠16天，妊娠13天和妊娠25天，而且主要在

4、骨髓間質(zhì)的細(xì)胞質(zhì)表達(dá)?？傊?，綿羊妊娠早期ISG15 mRNA和蛋白表達(dá)量的增加與孕體來(lái)源的干擾素tau有關(guān)。
　　2、mRNA和蛋白水平進(jìn)行了PIBF因子表達(dá)的檢測(cè)，證明在妊娠16天羊骨髓中mRNA的表達(dá)量高于未妊娠16天，妊娠13天和妊娠25天。而且在妊娠16天表達(dá)量達(dá)最高。然而，到妊娠25天mRNA表達(dá)量則會(huì)逐漸降低，蛋白水平的表達(dá)與mRNA水平的表達(dá)基本一致，在妊娠13天、妊娠16天和妊娠25天羊骨髓中的表達(dá)，在未妊娠16天

5、的骨髓中不表達(dá)。妊娠16天和25天骨髓PIBF蛋白的表達(dá)量顯著高于妊娠13天，妊娠16天和妊娠25天的骨髓中PIBF蛋白的表達(dá)明顯，基本沒(méi)有差異。
　　總之，在綿羊妊娠早期，孕體來(lái)源的干擾素tau通過(guò)血液循環(huán)，作用于骨髓，使骨髓間質(zhì)的細(xì)胞上調(diào)表達(dá)ISG15 mRNA和蛋白；同時(shí)結(jié)果表明，妊娠早期PIBF也上調(diào)表達(dá)，可能是干擾素tau通過(guò)血液循環(huán)抑制黃體的退化，使黃體持續(xù)產(chǎn)生孕酮，從而誘導(dǎo)PIBF蛋白上調(diào)表達(dá)，調(diào)節(jié)骨髓的免疫功能，使