不同啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)DR1172轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)型油菜的抗旱性研究.pdf

1、Classified Index:U.D.C:Southwest Universityof Science and TechnologyMaster Degree ThesisDrought Resistance Research ofTransgenic Brassica napus L. with DR1172Gene Driven by Different PromotersGrade: 2013Candidate:MingLi

2、MaAcademic Degree Applied for: MasterSpeciality: BiologySupervisor: QiLin DaiMay,27,2016西南科技大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 第 I頁摘 要干旱是植物生長發(fā)育過程中影響最大的非生物脅迫因素之一，它嚴(yán)重制約了全球農(nóng)業(yè)的發(fā)展。目前，對(duì)植物的抗旱機(jī)理，以及培育具有抗旱的轉(zhuǎn)基因新品種成為研究的熱點(diǎn)。甘藍(lán)型油菜，屬于十字花科蕓薹屬，是植物蛋白和植物油主要來源之一。在

3、我國，因干旱導(dǎo)致油菜年產(chǎn)量損失達(dá) 20%以上。近來，利用基因工程技術(shù)，通過轉(zhuǎn)入外源過表達(dá)基因來提高油菜的抗逆能力已經(jīng)取得一定的成效，而增加的油菜抗逆功能的同時(shí)，又不影響油菜的品質(zhì)和產(chǎn)量也受到了更多的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)，分別構(gòu)建 CaMV35S 和 AtPUB19 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的 DR1172 基因的植物表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入甘藍(lán)型油菜中，從而研究不同啟動(dòng)子對(duì)轉(zhuǎn)DR1172 基因甘藍(lán)型油菜的抗旱性能力的影響，以及對(duì)轉(zhuǎn)基因油菜生理生化造成的

4、差異，最終篩選出綜合性狀良好的油菜新品種。目前，取得的成果如下：（1）分別構(gòu)建了植物表達(dá)載體 pCambia-AtPUB19::DR1172 和PBI121-CaMV35S::DR1172，并成功轉(zhuǎn)化 EHA105 感受態(tài)細(xì)胞。（2）通過使用分析軟件，發(fā)現(xiàn) AtPUB19 啟動(dòng)子順式作用元件上含有與干旱、脫水相關(guān)應(yīng)答的元件、啟動(dòng)子和增強(qiáng)子的保守元件、啟動(dòng)子的核心保守序列，以及預(yù)測(cè)的兩個(gè)轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)。（3） 利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別將 EHA1

5、05 中的植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)入甘藍(lán)型油菜中，通過 PCR 檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)含有 pCambia-AtPUB19::DR1172 的轉(zhuǎn)基因植物 78 株和含有PBI121-CaMV35S::DR1172 的轉(zhuǎn)基因植物 46 株。（4）采用 PEG6000 模擬干旱實(shí)驗(yàn)處理的方法，分別對(duì) T1 代種子（非轉(zhuǎn)基、轉(zhuǎn) AtPUB19::DR1172、 轉(zhuǎn) CaMV35S::DR1172） 進(jìn)行不同 PEG 濃度的脅迫處理實(shí)驗(yàn)，以及 20%PEG 濃度下不

6、同時(shí)間的脅迫處理實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，在不同干旱情況下，CaMV35S 和 AtPUB19 啟動(dòng)子都可有效的驅(qū)動(dòng) DR1172 基因的表達(dá)， 但高度干旱脅迫時(shí)，與 CaMV35S 啟動(dòng)子相比較，AtPUB19 啟動(dòng)子可更高效的驅(qū)動(dòng) DR1172 基因的表達(dá)，且顯著提高油菜葉片的抗氧化酶活性。在不同時(shí)間的干旱脅迫后，轉(zhuǎn)CaMV35S::DR1172 基因組和轉(zhuǎn) AtPUB19::DR1172 基因組油菜葉片的抗氧化酶活性呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，而非轉(zhuǎn)基因