9B9抗體介導(dǎo)的靶向基因載體的研究.pdf

1、目的：為了提高腫瘤靶向性和治療效果，將具有EGFR/EGFRvⅢ靶向功能的9B9單抗包裹于非病毒載體PHPA-PEI外層，通過受配體介導(dǎo)方式靶向于肝腫瘤細(xì)胞，最終攜帶乙酰膽堿酶質(zhì)粒(AChE Gene)用于抗腫瘤治療。
　　方法：以聚天冬氨酸作為骨架，3-氨基丙醇反應(yīng)打開酰胺環(huán)，經(jīng)羰基二咪唑(CDI)活化后將PEI600結(jié)合至骨架材料上，得到聚羥丙基天冬酰胺-聚乙烯亞胺(PHPA-PEI)共聚物，包裹上9B9單抗后制備得到PP9m

2、N復(fù)合物。通過1HNMR、元素分析以及GPC等化學(xué)表征實(shí)驗(yàn)，確定了PHPA-PEI的結(jié)構(gòu)組成。通過凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、粒徑和表面電荷的測定、穩(wěn)定性考察、細(xì)胞毒性測定、細(xì)胞攝取途徑研究，體外轉(zhuǎn)染等生物物理學(xué)及細(xì)胞分子學(xué)實(shí)驗(yàn)，顯示了復(fù)合物PP9mN形成的納米粒能有效的縮聚質(zhì)粒DNA，粒徑在300 nm左右，在SMMC-7721，HepG2，Bel-7404和COS-7細(xì)胞上，毒性比PEI25 kD小很多，在其最佳轉(zhuǎn)染質(zhì)量比時(shí)，能有效地被SMMC-

3、7721細(xì)胞通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑攝取，并將報(bào)告基因高效表達(dá)。通過對PP9mN復(fù)合物在小鼠體內(nèi)的各項(xiàng)生化指標(biāo)研究，以及對于荷瘤裸鼠的組織分布、轉(zhuǎn)染表達(dá)作了初步研究之后，攜帶治療基因AChE對荷瘤裸鼠進(jìn)行抑瘤治療。
　　結(jié)果：成功合成了載體材料PHPA-PEI，構(gòu)建出一種低毒、可降解、高效的新型非病毒載體。9B9單抗包裹形成的納米復(fù)合物能明顯的抑制腫瘤的生長，起到良好的抗腫瘤效果，同時(shí)9B9單抗自身的抗腫瘤作用能與AChE基因的