負(fù)載胚胎干細(xì)胞抗原的DC疫苗對肝癌小鼠皮下移植瘤的抗腫瘤免疫治療作用研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　以樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）為基礎(chǔ)的抗腫瘤免疫療法已成為研究熱點。腫瘤組織表達(dá)多種胚胎期抗原，與胚胎干細(xì)胞之間存在共同的抗原或細(xì)胞表面分子。本研究通過制備胚胎干細(xì)胞抗原且用其致敏樹突狀細(xì)胞制備DC疫苗，旨在觀察負(fù)載胚胎干細(xì)胞抗原的DC疫苗在小鼠肝癌皮下移植瘤模型中的抗腫瘤免疫治療作用。
　　研究方法：
　　1.通過聯(lián)合rmGM-CSF、rmIL-4，培養(yǎng)C57BL/6J小鼠骨

2、髓來源的DC，胚胎干細(xì)胞抗原或肝癌細(xì)胞抗原誘導(dǎo)其成熟，制成DC疫苗；流式細(xì)胞術(shù)分析胚胎干細(xì)胞抗原致敏的DC疫苗、肝癌細(xì)胞抗原致敏的DC疫苗表面分子CD11c、CD80、CD86表達(dá)情況；
　　2.小鼠肝癌細(xì)胞株（Hepa1-6）4×10^6/只接種于小鼠腹部皮下，建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型。根據(jù)不同抗原致敏的DC疫苗，設(shè)ESC-DC疫苗組、Hepa1-6-DC疫苗組、DC疫苗組和對照組（PBS組），每組10只小鼠，每周1次接種疫苗

3、（2×10^6/只）或PBS（0.1ml/只），共3個治療周期。每5天觀察并記錄各組小鼠皮下腫瘤的橫徑、長徑，在任意腫瘤直徑≥15mm，或開始出現(xiàn)腫瘤潰瘍時處死所有小鼠，稱量并比較各組腫瘤的質(zhì)量。在治療結(jié)束后5天ELISA法檢測小鼠外周血清IgG含量；LDH法檢測小鼠脾臟淋巴細(xì)胞對Hepa1-6的細(xì)胞毒性殺傷能力；流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞含量。
　　結(jié)果：
　　1.成功培養(yǎng)小鼠骨髓

4、來源的DC，經(jīng)流式表型檢測，DC表面分子CD11c約占78％，ESC-DC表面分子CD80、CD86表達(dá)率(53.81%±4.48%、52.63%±5.83%)高于Hepa1-6-DC(46.57%±5.93%、42.88%±3.90%)、DC(35.04%±9.91%、34.67%±5.10%)，p<0.05；
　　2.動態(tài)監(jiān)測各治療組和對照組小鼠皮下腫瘤的生長情況，結(jié)果顯示：腫瘤平均生長速度ESC-DC組

5、組　　3.于治療結(jié)束后5天，對荷瘤小鼠進(jìn)行免疫學(xué)指標(biāo)檢測，結(jié)果顯示：ESC-DC組外周血IgG分泌水平高于Hepa1-6-DC組、DC組、PBS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，分別為77.99±6.43ng

6、/ml、49.47±4.36ng/ml、40.61±5.17ng/ml、17.21±2.55ng/ml；ESC-DC組荷瘤小鼠脾臟淋巴細(xì)胞對Hepa1-6的細(xì)胞毒殺能力高于Hepa1-6-DC組、DC組、PBS組，在不同的效靶比例中差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；流式檢測脾臟CD4+CD25+FoxP3+ T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例，結(jié)果顯示：ESC-DC組（5.94%±0.98%）明顯低于Hepa1-6-DC組（8.39%±0.60%）、DC組

7、（10.65%±1.06%）、PBS組（13.27%±0.96%)，p<0.05。
　　結(jié)論：
　　1.胚胎干細(xì)胞抗原在體外能有效刺激小鼠骨髓來源的DC成熟，效果優(yōu)于肝癌細(xì)胞(Hepa1-6)抗原；
　　2.ESC-DC疫苗、Hepa1-6-DC疫苗能夠誘導(dǎo)荷瘤小鼠產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)，減緩肝癌小鼠皮下移植瘤的生長速度；
　　3.ESC-DC疫苗對肝癌小鼠的抗腫瘤免疫保護(hù)作用優(yōu)于Hepa1-6-DC疫苗及未經(jīng)抗原致