雷蒙德氏棉、達爾文氏棉BAC文庫的構(gòu)建及特異單克隆的篩選.pdf

1、雷蒙德氏棉(Gossypium raimondii)是二倍體D5基因組棉種，是棉屬中基因組最小(880Mb)的棉種，也是目前異源四倍體D亞組公認的可能供體種之一。雷蒙德氏棉具有提高產(chǎn)量，提升纖維品質(zhì)，并具有抗旱、抗黃萎病及抗棉鈴蟲、葉蟬、薊馬、卷葉蟲等的潛質(zhì)。雷蒙德氏棉基因組測序的完成，為挖掘其豐富的野生型資源打下基礎(chǔ)。
　　達爾文氏棉(Gossypium darwinii)是四倍體(AD)5基因組棉種，其主要布于加拉帕哥斯群島，

2、其野生環(huán)境惡劣，擁有抗干旱、干熱風(fēng)、耐鹽堿等潛在價值。達爾文氏棉的耐鹽堿性狀使其在棉花抗性育種中具有重要的研究價值。
　　CCICR(Chinese Central Institute of Cotton Research)是被最新鑒定出的一個棉屬特有的轉(zhuǎn)座子家族，其在棉花A基因組和D基因組棉種序列所占比例差異巨大，在A基因組序列中占36.2％，在D基因組中所占比例幾乎為零，因此被認為是造成棉花A和D基因組大小差異的主要原因。通過

3、已有棉種BAC文庫篩選含有CCICR的特異單克隆為后續(xù)深入分析其在棉屬中的進化、分布情況打下基礎(chǔ)。
　　本文基于已有的二倍體和四倍體棉種BAC文庫的構(gòu)建方法，以雷蒙德氏棉和達爾文氏棉為材料，成功構(gòu)建了野生棉雷蒙德氏棉和達爾文氏棉的BAC文庫。并用已有的關(guān)于CCICR的SSR分子標(biāo)記引物NAU1202從海島棉Pima90-53、達爾文氏棉和毛棉中篩選出含有CCICR的單BAC克隆。取得了如下研究成果：
　　1、本文以雷蒙德氏棉

4、和達爾文氏棉為材料，以pIndigoBAC-5(Hind III)和pHZAUBAC1為載體，分別構(gòu)建了雷蒙德氏棉和達爾文氏棉BAC文庫。其中雷蒙德氏棉BAC文庫共包含26,880個克隆，平均插入片段為127kb，覆蓋該棉種全基因組的3.7倍左右，克隆空載率小于5%。達爾文氏棉BAC文庫有200832個克隆，覆蓋達爾文氏棉基因組10倍，平均插入序列長度為122kb，克隆空載率小于5%。經(jīng)檢測，重組BAC-DNA能夠在大腸桿菌中穩(wěn)定遺傳，

5、文庫的穩(wěn)定性符合后續(xù)實驗要求。
　　2、用陸地棉遺傳連鎖群的SSR引物NAU1201，采用三級PCR方法篩選海島棉Pima90-53、達爾文氏棉和毛棉文庫。共得到30個含有CCICR的單BAC克隆。具體結(jié)果如下：海島棉Pima90-53中得到31-G-32、37-F-10、42-C-10、170-G-11、170-G-12、170-G-13、242-C-11、299-I-16、299-N-20、317-K-22、317-L-22；