苦蕎BAC文庫(kù)的構(gòu)建及BAC末端序列分析.pdf

1、為了深入挖掘苦蕎的基因組信息，篩選與苦蕎品質(zhì)相關(guān)的功能基因，以及為苦蕎全基因組測(cè)序提供幫助,以苦蕎品種“晉蕎麥2號(hào)”為材料，構(gòu)建了苦蕎基因組BAC文庫(kù)、對(duì)部分克隆進(jìn)行末端測(cè)序，對(duì)測(cè)序后比對(duì)得到的部分相關(guān)基因表達(dá)量進(jìn)行分析。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴參考Peterson等方法獲得高分子量的核基因組DNA，并成功構(gòu)建了插入片段約123 kb，克隆數(shù)量為30000個(gè)的苦蕎基因組 BAC文庫(kù)，覆蓋苦蕎基因組約為6.9倍。⑵隨機(jī)選取48個(gè)

2、BAC克隆進(jìn)行序列末端測(cè)序，得到89條BAC末端序列，通過(guò)序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，有7條（8％）有比對(duì)結(jié)果。其中，有末端序列與rpoTm2、Trrap和MDR1等已知基因相似，這些基因與DNA錨定，物質(zhì)跨膜運(yùn)輸和磷酸轉(zhuǎn)移酶活性等功能有關(guān)。分析還發(fā)現(xiàn)末端序列40G19-F可能是苦蕎基因組的重復(fù)序列。對(duì)3個(gè)BAC全長(zhǎng)序列進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)與植物發(fā)育調(diào)控、種子發(fā)育和脯氨酸合成相關(guān)的基因，分別是homeobox、RIE1和TPRP-F1基因。⑶通過(guò)實(shí)時(shí)熒光