羅氏沼蝦諾達病毒單克隆抗體的制備及應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、羅氏沼蝦肌肉白濁病的病原是羅氏沼蝦諾達病毒。羅氏沼蝦諾達病毒粒子呈廿面體,無囊膜,大小為23~25nm,病毒核酸為單鏈RNA,由2個片段組成,RNA-1和RNA-2,分別為3.0kb和1.3kb。MrNV為首個從甲殼類中分離到的諾達病毒?! ∮锰峒兊腗rNV免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾細胞與SP2/0鼠骨髓瘤細胞融合,得到12株能特異分泌抗MrNV的單克隆抗體(monoclonalantibody,Mab)的雜交瘤細胞。注射小鼠,制

2、備腹水單克隆抗體,ELISA效價為1:105~106。亞型鑒定結(jié)果表明,有6株單抗為IgG1型,4株單抗為IgG2a型,2株單抗為IgG2b型。12株單抗與對蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)和對蝦桃拉綜合癥病毒(TSV)均無交叉反應(yīng)。Westernbolt分析表明,小鼠單抗2B5能與MrNV43kD的外膜蛋白特異性結(jié)合。  制備MrNV兔抗血清,挑選效價高的腹水單抗2B5,建立了檢測羅氏沼蝦諾達病毒的三抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法(thre

3、eantibodiessandwich-ELISATAS-ELISA),TAS-ELISA最適反應(yīng)條件為:兔抗體以1μg/mL包板,小鼠單抗2B5的工作濃度為1:50,000,該法檢測MrNV的靈敏度達0.98ng。通過對病蝦及疑似病蝦的病毒檢測,表明TAS-ELISA法比間接ELISA法、核酸電泳法有更高的陽性檢出率和符合率;此外還摸索了降低病毒測定孵育溫度和縮短孵育時間對病毒檢測的影響,表明各步孵育溫度和時間分別為25℃和20min

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