水稻條紋病毒（RSV）單克隆抗體的制備及檢測應(yīng)用.pdf

1、近年來,由水稻條紋病毒(Rice stripe virus,RSV)引起的水稻條紋病在江蘇省的一些地區(qū)廣泛流行,已成為江蘇省水稻生產(chǎn)前期的一個重要病害.目前對于水稻條紋病的防治主要還是以種植抗病品種和適時治蟲為主.灰飛虱的帶毒蟲量是條紋葉枯病發(fā)生流行的主要影響因子,因此建立一種快速、靈敏檢測灰飛虱帶毒率的方法是迫切需要的.為此,我們制備了RSV單克隆抗體,并建立了RSV的檢測方法.用水稻條紋病毒(RSV)免疫的BALB/c小鼠脾細(xì)胞與S

2、P2/0鼠骨髓瘤細(xì)胞融合,經(jīng)篩選克隆,獲得4株能穩(wěn)定傳代且分泌抗RSV單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞.各株單抗腹水的ELISA效價均在1:80000-1:5120000之間.建立了間接ELISA測定RSV的方法,4株單抗檢測病汁液的稀釋度能達(dá)到2560倍以上,與其它病毒無交叉反應(yīng).Western blot分析表明4株單抗均與RSV的35 kD的外殼蛋白亞基有特異反應(yīng).用建立的間接ELISA對江蘇省部分縣市大田灰飛虱帶毒率進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示灰飛虱

3、的帶毒率為12.5％-41.5％.按常規(guī)飽和硫酸銨沉淀法純化了3株單抗3B9、2H2和2E5,測定其IgG含量分別為:6.52 mg/ml、10.25 mg/ml和9.64 mg/ml.利用過碘酸鈉法用辣根過氧化物酶標(biāo)記了3株單抗的酶標(biāo)抗體HRP-3B9、HRP-2H2和HRP-2E5,測定其效價分別達(dá)到1:25600、1:1600和1:3200,直接ELISA方陣試驗(yàn)確定了酶標(biāo)抗體HRP-3B9、HRP-2H2和HRP-2E5的最佳工