鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在介導(dǎo)尾加壓素Ⅱ致心肌肥大中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的： 心肌肥大不僅是心血管疾病發(fā)生猝死的重要預(yù)測因子，還是導(dǎo)致心力衰竭的危險(xiǎn)因素，因而研究心肌肥大的發(fā)生機(jī)制對(duì)于心力衰竭和其它肥厚型心肌病變的防治具有重要意義。近來發(fā)現(xiàn)，尾加壓素II(Urotensin II，un)可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞產(chǎn)生肥大效應(yīng)，但是其致心肌細(xì)胞肥大的原因和機(jī)制不太明確。研究表明，鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin，CaN)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在壓力超負(fù)荷性心肌肥大中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，是超負(fù)荷性心肌肥大的重要上游調(diào)節(jié)機(jī)

2、制。為弄清CaN信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否參與了UII誘導(dǎo)的心肌肥大反應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)以離體培養(yǎng)的SD乳鼠心肌細(xì)胞為研究對(duì)象，從分子與細(xì)胞水平觀察UII所致的心肌肥大反應(yīng)中，CaN、MAPK信號(hào)通路中若干信號(hào)分子的變化，探討UII致心肌肥大的機(jī)制，CaN信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在UII致心肌肥大中的作用及機(jī)制，以及CaN信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和MAPK等其它信號(hào)通路在心肌肥大中的相互關(guān)系，為臨床防治心肌肥大及心力衰竭提供理論依據(jù)。 方法： 以離體培養(yǎng)的SD乳

3、鼠心肌細(xì)胞為研究對(duì)象，用UII干預(yù)，建立離體培養(yǎng)的新生鼠肥大心肌細(xì)胞模型。運(yùn)用Real time-PCR法，Western blot技術(shù)等，觀察UII對(duì)培養(yǎng)心肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、DNA與蛋白質(zhì)合成的影響，以期證實(shí)UII可誘導(dǎo)典型的心肌肥大效應(yīng)，以及心肌肥大過程中CaN、MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中相關(guān)分子、蛋白的表達(dá)變化。運(yùn)用熒光探針標(biāo)記技術(shù)，觀察un對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化的影響；進(jìn)一步應(yīng)用相關(guān)拮抗劑，觀察UII引起心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變

4、化是否為胞外Ca2+內(nèi)流或肌漿網(wǎng)鈣庫釋放所致。 結(jié)果： ①隨著un濃度的增加，心肌細(xì)胞β-MHC、CaN以及磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)等的mRNA和蛋白表達(dá)明顯增加，其中10-8、10-7 mol/L UII處理組與對(duì)照組相比較，增加顯著(P<0.05)。②用10-8 mol/L UII處理心肌細(xì)胞12h、24h、48h，隨著時(shí)間增加，心肌細(xì)胞β-MHC、CaN以及P-ERK1/2等的mRNA和蛋白表達(dá)呈遞增

5、趨勢(shì)，其中處理24h組與正常對(duì)照組有顯著差異(P<0.05)。③預(yù)先用環(huán)胞素A(cyclosporin A，CsA)5μmol/L處理正常心肌細(xì)胞24h，然后用10-8 mol/L UII作用24h，心肌細(xì)胞p-MHC、CaN以及P-ERKI/2等的mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)，與正常心肌細(xì)胞經(jīng)10-8 mol/L UII單純作用24h差異有顯著意義(P<0.05)。④正常對(duì)照組心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度較低(31.65±2.37)。⑤單純UI

6、I干預(yù)組鈣離子熒光強(qiáng)度與正常對(duì)照組比較，增加明顯(87.13±5.72)(P<0.05)。⑥尼卡地平提前阻斷+UII干預(yù)組以及IP3受體拮抗劑Xestspongin C+UII干預(yù)組鈣離子熒光強(qiáng)度也有增加，分別為(59，43±4，76)、(54.79±5.18)，與正常對(duì)照組比較，增加明顯(P<0.05)，但增加幅度小于10-8 mol/L UII單純作用組(P<0.05)。 結(jié)論： ①鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通

7、路可能在心肌肥大中起重要作用。鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)在心肌肥大過程中與UII作用呈現(xiàn)劑量、時(shí)間相關(guān)性，其效應(yīng)可被CaN阻斷劑CsA阻斷。②MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與了UII誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大過程。其效應(yīng)亦可部分被CsA阻斷。鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之間可能存在“互話”關(guān)系。③尾加壓素II(UII)可引起心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增高，其主要通過兩方面：細(xì)胞外的鈣離子內(nèi)流；肌漿網(wǎng)鈣離子釋放。本實(shí)驗(yàn)提示，UI