鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶信號(hào)通路介導(dǎo)慢性缺氧大鼠致右心室心肌凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、目的：鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)是目前所知的唯一依賴于Ca2+/鈣調(diào)素的磷蛋白磷酸酶，我們研究顯示其介導(dǎo)慢性缺氧致右心室肥大，有研究認(rèn)為其有抑制凋亡的作用，但其對(duì)凋亡的影響仍有爭(zhēng)議。本研究以慢性缺氧性幼年大鼠為研究對(duì)象，研究CaN介導(dǎo)慢性缺氧致右心窒心肌凋亡作用機(jī)制。 方法：1.建立大鼠慢性持續(xù)缺氧的動(dòng)物模型。 2.30只大鼠按照隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)分為3個(gè)組：環(huán)孢菌素(CsA：CaN抑制劑) (10mg.kg-1.d-1

2、，腹腔注射)處理組，慢性缺氧組，正常對(duì)照組。處理組和慢性缺氧組分別暴露于正常氣壓下行慢性持續(xù)缺氧(9.5％-10.5％O2，21天)。 3.于21天后檢測(cè)下列指標(biāo)：右心室重量與左心室、室間隔重量的和之比[RV/(LV+IVS)]，右心室重量與體重之比(RV/BW)，右心室心肌組織石蠟切片HE染色，Hoechst33258熒光染色，TUNEL法觀察凋亡細(xì)胞，檢測(cè)凋亡指數(shù)AI(apoptosisindex)，半定量RT-PCR法測(cè)鈣

3、調(diào)神經(jīng)磷酸酶Aβ(CnAβ)mRNA表達(dá)水平，心臟肌球蛋白β重鏈(β-MHC)mRNA表達(dá)水平，凋亡蛋白Bcl-2、BadmRNA表達(dá)水平以及Western-blot法測(cè)CnAβ、活化T細(xì)胞的核因子3(NFAT3)、β-MHC、凋亡蛋白Bcl-2和Bad的蛋白表達(dá)。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的方差分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1.各組大鼠右心室肥厚程度的改變和右心室心肌凋亡指數(shù)變化 缺氧21天后，

4、RV/(LV+IVS)、RV/BW、右心室β-MHCmRNA表達(dá)和蛋白水平在慢性缺氧組大鼠均明顯高于正常組(P，respectively＜0.01)，而CsA處理組均明顯低于慢性缺氧組(P，respectively＜0.01)，且與正常組之間差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P，respectively＞0.05)。缺氧21天后，CsA處理組大鼠凋亡指數(shù)AI均明顯高于慢性缺氧組(P，respectively＜0.01)，且慢性缺氧組AI均明顯高于正常

5、組(P，respectively＜0.01)。 2.各組大鼠右心室心肌CnAβ、NFAT3表達(dá)的變化 缺氧21天后，，慢性缺氧組大鼠右心室CnAβmRNA和蛋白表達(dá)、NFAT3蛋白表達(dá)均明顯高于正常對(duì)照組(P，respectively＜0.01)，而CsA處理組均明顯低于慢性缺氧組(P，respectively＜0.01)，且與正常組之間差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P，respectively＞0.05)。 3.各組大鼠

6、右心室心肌Bcl-2、BadmRNA和蛋白水平變化 CsA處理組凋亡蛋白Bcl-2mRNA表達(dá)和蛋白水平均明顯低于慢性缺氧組(P，respectively＜0.01)，且慢性缺氧組凋亡蛋白Bcl-2mRNA表達(dá)和蛋白水平均也明顯低于正常組(P，respectively＜0.05)。CsA處理組、慢性缺氧組與正常對(duì)照組各組大鼠右心室BadmRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)的改變比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4.各組大鼠右心室組織

7、Bcl-2/Bad比值的改變 CsA處理組大鼠右心室Bcl-2/Bad比值明顯低于慢性缺氧組(P＜0.05)，慢性缺氧組大鼠右心室Bcl-2/Bad比值明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.05)。 結(jié)論：1.缺氧可引起右心室心肌肥厚同時(shí)也存在右心室心肌凋亡。 2.CaN介導(dǎo)慢性缺氧致右心室肥大，右心室心肌凋亡的發(fā)病過程，促進(jìn)慢性缺氧右心室心肌肥大，抑制其凋亡，為臨床抑制心肌重構(gòu)提供了更多的理論依據(jù)。 3.CaN/