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1、目的:觀察補(bǔ)體C3對(duì)體外培養(yǎng)神經(jīng)元突起生長(zhǎng)的影響,并進(jìn)一步對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步分析。 方法:在原代皮層神經(jīng)元培養(yǎng)液中中分別加入不同濃度的外源性補(bǔ)體蛋白C3、C3活性片段C3a,WST–8法檢測(cè)其對(duì)神經(jīng)元的活力影響,觀察C3及C3a對(duì)神經(jīng)元突起生長(zhǎng)的影響;神經(jīng)元培養(yǎng)液中加入C3a受體(C3aR)抑制劑SB290157后,再分別加入補(bǔ)體C3、C3a觀察神經(jīng)元突起生長(zhǎng)的變化。Image J圖像分析軟件采集各實(shí)驗(yàn)組每個(gè)大腦皮層神經(jīng)元最長(zhǎng)
2、突起長(zhǎng)度。空白培養(yǎng)液和培養(yǎng)液中加入其它試劑的神經(jīng)元作為對(duì)照組。 結(jié)果:培養(yǎng)液中分別加入一定濃度范圍內(nèi)的補(bǔ)體C3后的神經(jīng)元活性均不受影響;同一培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)液中加入特定濃度的C3、C3a的神經(jīng)元突起均較正常對(duì)照組顯著增長(zhǎng);而神經(jīng)元培養(yǎng)液中加入C3a受體抑制劑SB290157后再加入相應(yīng)濃度的C3、C3a,其同一培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)C3、C3a實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)突長(zhǎng)度與正常對(duì)照組均無(wú)明顯差異。 結(jié)論:低濃度補(bǔ)體C3對(duì)體外培養(yǎng)原代神經(jīng)元神經(jīng)突起
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