不同結(jié)合狀態(tài)硫酸軟骨素B對(duì)三維培養(yǎng)的雞胚背根節(jié)神經(jīng)元突起生長(zhǎng)影響的機(jī)理研究.pdf

1、目的: 體外模擬神經(jīng)元在基質(zhì)中生長(zhǎng)的情況，構(gòu)建雞胚背根節(jié)細(xì)胞3D生長(zhǎng)模型，觀察游離的和與SeaPrep~瓊脂糖凝膠共價(jià)結(jié)合的硫酸軟骨素B(CS-B)在不同濃度的瓊脂糖凝膠中對(duì)雞胚背根節(jié)神經(jīng)突起生長(zhǎng)的影響。利用原子力顯微鏡觀察和比較不同濃度的瓊脂糖凝膠及與CS-B共價(jià)結(jié)合的凝膠在孔面積、分子輪廓等方面的差異。通過(guò)上述觀察探討CS-B多糖長(zhǎng)鏈對(duì)在三維空間中生長(zhǎng)的雞胚背根節(jié)神經(jīng)突起生長(zhǎng)的影響及其作用機(jī)制。 方法: 1．

2、配制無(wú)菌的0.5％、0.75％、1％、1.25％、1.5％SeaPrepR瓊脂糖凝膠溶液，構(gòu)建三維培養(yǎng)系統(tǒng)。 2．采用CDI(1’1’-羰基二咪唑)介導(dǎo)共價(jià)技術(shù)對(duì)瓊脂糖水凝膠進(jìn)行CS-B共價(jià)修飾，形成新的枝接聚合物。 3．將E9-10天的雞胚背根節(jié)剪碎后接種于瓊脂糖水凝膠中，在24h、48h、72h和96h觀察神經(jīng)細(xì)胞團(tuán)生長(zhǎng)情況，并測(cè)量在普通SeaPrepR瓊脂糖水凝膠、添加游離的CS-B及共價(jià)結(jié)合CS-B的瓊脂糖水凝膠

3、中生長(zhǎng)的神經(jīng)突起長(zhǎng)度。 4．利用原子力顯微鏡觀測(cè)SeaPrep~瓊脂糖水凝膠的孔面積，并比較在共價(jià)結(jié)合了CS-B后瓊脂糖水凝膠孔面積及分子結(jié)構(gòu)等物理特性的變化。 結(jié)果: 1．雞胚背根節(jié)神經(jīng)突起在1％的瓊脂糖水凝膠中開(kāi)始呈3D生長(zhǎng)，在小于1％的瓊脂糖水凝膠中只能呈2D生長(zhǎng)。 2．隨著瓊脂糖水凝膠濃度增加，神經(jīng)突起的長(zhǎng)度逐漸縮短。在1％和1.25％的瓊脂糖水凝膠中，游離和共價(jià)結(jié)合的CS． B對(duì)3D生長(zhǎng)

4、的神經(jīng)突起有明顯的抑制作用(P<0.05)，但對(duì)2D生長(zhǎng)的神經(jīng)突起并沒(méi)有明顯的抑制效應(yīng)。 3．在高濃度(1.5％)的瓊脂糖水凝膠當(dāng)中，僅觀察到共價(jià)結(jié)合的CS-B可以抑制神經(jīng)突起的生長(zhǎng)(P<0.05)。 4．CS-B在部分3D培養(yǎng)中有讓神經(jīng)突起成束生長(zhǎng)的傾向。 5．原子力顯微鏡顯示：隨著瓊脂糖水凝膠濃度增加，其孔面積逐漸減小：我們首次發(fā)現(xiàn)了共價(jià)結(jié)合的CS-B可以明顯改變凝膠分子形態(tài)和空間聚合狀態(tài)；在1％、1.25％

5、、1.5％的濃度下，共價(jià)結(jié)合的CS-B可以縮小瓊脂糖水凝膠的孔面積(P<0.05)；但在0.75％和1.75％兩個(gè)濃度下瓊脂糖水凝膠孔面積沒(méi)有受到CS-B的影響(P>0.05)；隨著濃度增大，普通瓊脂糖水凝膠和共價(jià)結(jié)合CS-B的瓊脂糖水凝膠的孔面積均呈指數(shù)下降，指數(shù)曲線擬合方程分別為y=7.209e-0.91x，y=7.1203e-0.91x。 結(jié)論: 1．雞胚背根節(jié)神經(jīng)團(tuán)在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀態(tài)與瓊脂糖水凝膠濃度密切相關(guān)。