人工合成硫酸軟骨素結合肽促小鼠小腦顆粒細胞神經突生長實驗研究.pdf

1、硫酸軟骨素蛋白聚糖（CSPGs）在脊髓損傷后形成的膠質瘢痕的微環(huán)境中含量升高，它是一類重要的軸突再生抑制因子。近些年的研究表明，CSPGs對神經損傷修復的抑制作用是通過硫酸軟骨素（CS）實現(xiàn)的。所以我們通過噬菌體展示技術篩選出了幾種硫酸軟骨素結合肽，并且通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）鑒定了其中一種與CS表現(xiàn)出最強的親和力的結合肽TR。
　　在本課題中，我們主要通過軸突生長實驗、CSPGs斑塊實驗和免疫印跡實驗（Western

2、Blot）研究了結合肽TR（實驗組）和隨機肽TS（對照組）在原代小鼠小腦顆粒細胞中對CSPGs的功能的作用及相關的信號通路的改變；另外用人神經母細胞瘤細胞（SK-N-SH）做了劃痕實驗，研究CSPGs和CS結合肽TR對神經細胞遷移的影響。實驗結果顯示CS結合肽TR表現(xiàn)出對CSPGs在軸突再生中抑制功能有拮抗拮抗作用。其中在軸突生長實驗中，CSPGs濃度在0.5-5μg/mL范圍內隨著濃度的升高對軸突的生長有顯著的抑制作用（CSPGs濃度

3、為1.0和2.5μg/mL時，P＜0.01）。CSPGs濃度為1μg/mL時，結合肽TR給藥濃度50-200μg/mL時均能顯著促進軸突的生長（TR濃度為100和200μg/mL時，P＜0.01）。在CSPGs斑塊實驗中，與對照組相比，50μg/mL結合肽TR給藥時，小腦顆粒細胞軸突可以穿過CSPGs（5μg/mL）形成的斑塊邊界。在免疫印跡實驗中，我們發(fā)現(xiàn)CSPGs（1μg/mL）降低了L1、pERK/ERK、mTOR的表達水平，而共

4、同給予TR結果顯示可不同程度提高L1、pERK/ERK和mTOR的表達水平。劃痕實驗觀察到：與對照組相比，CSPGs濃度為2μg/mL時能抑制SK-N-SH細胞的遷移；與CSPGs組相比，CS結合肽TR（100μg/mL）共同處理時能夠促進細胞的遷移。上述研究結果表明在含有CSPGs的抑制環(huán)境中CS結合肽TR可通過增加L1表達，并通過調控Erk、mTOR信號通路來促進軸突的生長，且能改善神經細胞的生長狀態(tài)，說明結合肽 TR其有應用于神經