惡性腫瘤新標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)及靶點(diǎn)藥物研究.pdf

1、惡性腫瘤是目前威脅人類健康的三大”殺手”之一。因其生長(zhǎng)迅速，造成組織器官的嚴(yán)重破壞，并且容易轉(zhuǎn)移，給人類的健康帶來很大的危害。因此，對(duì)惡性腫瘤來說，“早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療和有效治療”具有極其重要的意義。本論文第一部分主要探討ERGIC—53在白血病患者與正常人、CML患者不同臨床階段的表達(dá)水平差異，并在幾個(gè)耐藥細(xì)胞株及其敏感株中檢測(cè)其表達(dá)差異，預(yù)期ERGIC—53成為白血病早期診斷和判斷其所處臨床階段的新指標(biāo)；整合素αvβ3表達(dá)于多種

2、惡性腫瘤細(xì)胞表面，但它不表達(dá)于正常的內(nèi)皮細(xì)胞，因此，它是一個(gè)很好的藥物治療靶點(diǎn)。本論文本第二部分對(duì)其新的小分子抑制劑IH1062(3，5—二氯苯基雙胍)進(jìn)行研究，探討它在體內(nèi)外對(duì)整合素αvβ3陽性的惡性腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)失巢凋亡和抑制轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制。 1 ERGIC—53在白血病中的表達(dá) 我們通過PCR檢測(cè)K562/A02與K562、K562/G01與K562、MCF—7/ADR與MCF—7、HL60/ADR與HL60四對(duì)細(xì)

3、胞中的ERGIC—53表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)耐藥株K562/A02、K562/G01和MCF—7/ADR的ERGIC—53 mRNA表達(dá)水平比其對(duì)應(yīng)的敏感株高，分別是其敏感株的1.56倍、1.58倍和1.80倍(p<0.05)，而HL60/ADR與HL60對(duì)比并無此差異。這四對(duì)細(xì)胞株的共同點(diǎn)和區(qū)別就是：PgP參與了K562/A02、K562/G01和MCF—7/ADR三個(gè)耐藥株的耐藥的形成，具有藥物外排“泵”功能，但是并不參與HL60/ADR耐

4、藥的形成。因此我們推測(cè)ERGIC—53與PgP的轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)；104例白血病患者的骨髓和11位正常志愿者的外周血提取單個(gè)核細(xì)胞后進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR，白血病患者的ERGIC—53 mRNA平均表達(dá)水平是正常人的142.91±15.42倍(p<0.05)；在CML病人中，ERGIC—53 mRNA表達(dá)水平與其所處的臨床階段密切相關(guān)：急變期/加速期(314.28±34.73)高于慢性期(66.66±6.43)，慢性期高于緩解期(15.23±1.1

5、0)，p<0.05。因此，ERGIC—53表達(dá)水平的監(jiān)測(cè)具有重要的臨床意義，它可能會(huì)被用作白血病早期診斷，或用作輔助判斷CML臨床階段的新指標(biāo)。 2 IH1062誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞失巢凋亡和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的研究。 我實(shí)驗(yàn)室基于整合素αvβ3的晶體結(jié)構(gòu)通過計(jì)算機(jī)虛擬篩選和粘附抑制實(shí)驗(yàn)，篩選出整合素αvβ3新的抑制劑IH1062，本研究對(duì)其進(jìn)行更深一步的研究。主要目的是探討IH1062對(duì)整合素αvβ3高表達(dá)的惡性腫瘤的作用及機(jī)制

6、。IH1062在體外能夠通過影響FAK的磷酸化誘導(dǎo)黑色素瘤細(xì)胞M21的失巢凋亡，此過程中有caspase級(jí)聯(lián)的活化以及凋亡相關(guān)蛋白Survivin升高和Bcl—2/Bax比值升高。我們通過裸鼠尾靜脈接種M21細(xì)胞的方法成功的建立黑色素瘤裸鼠肺轉(zhuǎn)移模型，通過肺表面癌結(jié)節(jié)的情況評(píng)價(jià)肺轉(zhuǎn)移的程度。結(jié)果顯示，尾靜脈接種1×106組，2×106組和5×106組M21細(xì)胞均能100％形成肺轉(zhuǎn)移。1×106組，2×106組和5×106組平均每只裸鼠肺

7、表面癌結(jié)節(jié)：83.92±8.04，70.43±6.13，88.35±12.02，三組之間沒有明顯差異，對(duì)照組沒有癌結(jié)節(jié)出現(xiàn)。因此，用1×106個(gè)M21細(xì)胞尾靜脈接種裸鼠即可建立M21的裸鼠肺轉(zhuǎn)移模型，100％形成肺轉(zhuǎn)移灶。我們應(yīng)用此動(dòng)物模型進(jìn)行IH1062的初步體內(nèi)藥效學(xué)研究，結(jié)果顯示陰性對(duì)照組(接種M21，不加藥)、0.6 mg/kg組、1.2 mg/kg組和2.4 mg/kg組的癌結(jié)節(jié)數(shù)目均值分別為138.67±26.35、53.0

8、0±4.58、34.00±4.04和4.67±2.01。差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。病理學(xué)分析可見，陰性對(duì)照組鏡下多見大片腫瘤灶，甚至整個(gè)肺尖部布滿腫瘤細(xì)胞；0.6 mg/kg組多見灶性轉(zhuǎn)移灶，可見血管周圍大量腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)；1.2 mg/kg組和2.4 mg/kg組多見灶性和小灶性腫瘤灶，有的腫瘤灶僅有幾個(gè)腫瘤細(xì)胞組成，未見大片腫瘤灶?？傊邢蛘纤卅羦β3的小分子藥物IH1062在體內(nèi)外顯示出誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞失巢凋亡和抑制轉(zhuǎn)移的作用，是一個(gè)