比格犬頸椎后縱韌帶壓迫模型的建立及其交感神經(jīng)分布研究.pdf

1、背景：頸椎病是臨床最常見疾病之一，由于年輕白領(lǐng)人群的逐漸增長(zhǎng)，高負(fù)荷工作壓力及伏案工作時(shí)間的延長(zhǎng)，頸椎病已逐漸演變成為一種社會(huì)病。其主要表現(xiàn)可有頸部疼痛不適、上肢酸脹麻木疼痛、身體感覺異常以及行走步態(tài)不穩(wěn)、四肢肌力下降等障礙。一般來說，頸椎病的診斷并不復(fù)雜，詳細(xì)的詢問病史、仔細(xì)的體格檢查以及相應(yīng)的影像學(xué)檢查結(jié)合臨床醫(yī)師的工作經(jīng)驗(yàn)?zāi)軠?zhǔn)確的定位頸椎病的類型，可明確的定位神經(jīng)受壓損傷部位，針對(duì)病因?qū)ι窠?jīng)及時(shí)減壓可獲得良好的治療效果。
　

2、　 目前，我國(guó)對(duì)頸椎病的分類包括以下幾種：脊髓型頸椎病、神經(jīng)根型頸椎病、椎動(dòng)脈型頸椎病以及交感神經(jīng)型頸椎病。國(guó)內(nèi)外對(duì)于脊髓型頸椎病及神經(jīng)根型頸椎病的診斷及治療已基本達(dá)成共識(shí)并已形成基本的診療規(guī)范。但對(duì)于交感型頸椎病，由于對(duì)其發(fā)病機(jī)制并不十分明確，因而在其診斷及治療方面尚存有諸多爭(zhēng)議。在全國(guó)第二次頸椎病專題座談會(huì)中學(xué)者們將交感型頸椎病定義為：頸椎間盤退行性改變刺激或壓迫頸部交感神經(jīng)纖維，引起的一系列反射性癥狀。其臨床癥狀以頭痛、頭暈、耳

3、鳴、心動(dòng)過速、視物模糊、肢體發(fā)涼等交感神經(jīng)興奮癥狀為主。其主要體現(xiàn)在局部交感神經(jīng)興奮性增高，如頸部向上的椎動(dòng)脈血管外膜神經(jīng)興奮性收縮可致血管血供不足，出現(xiàn)頭暈、頭痛癥狀；如眼動(dòng)脈支及耳動(dòng)脈分支的血管神經(jīng)興奮性收縮可有視物模糊、耳鳴等癥狀；交感神經(jīng)興奮時(shí)胃腸部迷走神經(jīng)受抑制，可表現(xiàn)出胃腸道反應(yīng)如惡心嘔吐；交感神經(jīng)心內(nèi)支興奮性增高可引起心悸、心慌等。
　　 目前對(duì)于交感型頸椎病的發(fā)病機(jī)制尚不明確，有學(xué)者提出頸椎不穩(wěn)是引起交感型頸椎病

4、的原因之一，對(duì)該類患者行頸前路椎間隙減壓內(nèi)固定融合術(shù)后其交感神經(jīng)癥狀常有改善，但臨床上大多數(shù)交感型頸椎病患者并無明確的頸椎不穩(wěn)征象，我們對(duì)其行頸前路椎間隙減壓內(nèi)固定術(shù)后該類患者癥狀也能緩解。由此看來，頸椎不穩(wěn)不能解釋所有出現(xiàn)交感性癥狀的頸椎病因。我們對(duì)多數(shù)伴交感神經(jīng)癥狀頸椎病患者行頸椎MRI檢查，發(fā)現(xiàn)該類患者大多有頸椎生理曲度變直、多節(jié)段頸椎間盤膨出壓迫相應(yīng)后縱韌帶，此現(xiàn)象引起我們對(duì)交感型頸椎病的重新思考。
　　 多年來，學(xué)者們

5、發(fā)現(xiàn)頸部交感神經(jīng)分布較為豐富，其中椎旁結(jié)構(gòu)包括椎體、椎間盤、前縱韌帶、后縱韌帶等，均有交感神經(jīng)纖維支配。課題組在前期的國(guó)家自然科學(xué)基金課題研究中利用新西蘭大白兔做頸椎后縱韌帶神經(jīng)分布研究，乙醛酸化學(xué)染色標(biāo)記交感神經(jīng)表達(dá)的神經(jīng)肽Y可觀察到頸椎后縱韌帶含有豐富的交感神經(jīng)纖維。更有學(xué)者提出，炎癥等因素刺激或局部環(huán)境改變可導(dǎo)致神經(jīng)纖維增生，對(duì)神經(jīng)纖維表達(dá)的多肽分析是檢測(cè)神經(jīng)纖維數(shù)量的一種有效方法。
　　 目的：鑒于當(dāng)前諸多學(xué)說不能滿意解

6、釋頸交感神經(jīng)紊亂癥狀，而常規(guī)的頸前路減壓手術(shù)在切除了椎間盤及后縱韌帶可使部分患者交感神經(jīng)癥狀得以改善，我們?cè)O(shè)想是否頸后縱韌帶受壓與此類患者一系列交感神經(jīng)興奮或抑制癥狀有關(guān)。頸后縱韌帶受壓后其上分布的交感神經(jīng)纖維是否有所變化，以及該變化是否會(huì)引起頸部相關(guān)的不適反應(yīng)。
　　 本實(shí)驗(yàn)中我們擬建立頸椎后縱韌帶受壓動(dòng)物模型，并于模型建立成功后飼養(yǎng)數(shù)周并取出新鮮的后縱韌帶組織進(jìn)行化學(xué)染色觀察其上神經(jīng)分布形態(tài)，并且通過對(duì)比格犬后縱韌帶組織的提

7、取液進(jìn)行測(cè)量，檢測(cè)神經(jīng)纖維在后縱韌帶組織中的含量，精確計(jì)算不同動(dòng)物模型頸后縱韌帶神經(jīng)纖維含量的差異。
　　 方法：以往在神經(jīng)組織的疾病診斷和科研中，應(yīng)用常規(guī)HE染色可以觀察到神經(jīng)元及神經(jīng)纖維的全貌，但是它們的細(xì)微結(jié)構(gòu)和某些特殊成分需要特殊的染色方法才能顯示。交感神經(jīng)屬腎上腺能神經(jīng)，它能夠釋放單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，因此可以用現(xiàn)實(shí)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的方法研究交感神經(jīng)纖維分布。神經(jīng)肽Y可由交感神經(jīng)纖維表達(dá)，我們可通過借助神經(jīng)肽Y的染色觀察后縱韌

8、帶交感神經(jīng)纖維的形態(tài)。放射免疫技術(shù)為一種將放射性同位素測(cè)量的高度靈敏性、精確性和抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合的體外測(cè)定超微量(10-9～10-15g)物質(zhì)的新技術(shù)。
　　 我們課題組在前一課題中對(duì)新西蘭大白兔頸椎后縱韌帶神經(jīng)纖維表達(dá)的神經(jīng)肽Y標(biāo)記并應(yīng)用乙醛酸染色熒光顯微鏡進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)新西蘭大白兔頸椎后縱韌帶分布有豐富的交感神經(jīng)。本實(shí)驗(yàn)中我們選取成年健康的比格犬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)步驟可分如下三步。第一步為動(dòng)物模型建立：訂購(gòu)16只健

9、康成年雄性比格犬，對(duì)其進(jìn)行隨機(jī)分為兩組各八只，實(shí)驗(yàn)組采取頸前路C4/5椎間盤髓核組織取出后回植入該椎間隙的方法，并適當(dāng)向后擠壓后縱韌帶組織，造成比格犬頸椎后縱韌帶受壓模型；假手術(shù)對(duì)照組采取相同的頸前路顯露方法，但僅限顯露C4/5椎前結(jié)構(gòu)，并不處理該椎間隙。第二步為兩組動(dòng)物經(jīng)一段時(shí)間飼養(yǎng)過后，每組隨機(jī)選出兩只比格犬，頸前路手術(shù)取出后縱韌帶組織，對(duì)其進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色形態(tài)學(xué)觀察。第三步為對(duì)兩組剩余的12只比格犬行頸前路手術(shù)，對(duì)取出的后縱韌

10、帶組織進(jìn)行神經(jīng)肽Y標(biāo)記的放射性免疫學(xué)定量分析。
　　 結(jié)果：通過實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)比格犬頸椎體后緣有較為寬厚的后縱韌帶，其宏觀形態(tài)呈倒三角形，化學(xué)染色及神經(jīng)放射性免疫測(cè)量過程順利。實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們得出：(一)比格犬頸椎后縱韌帶受壓模型的建立成功、可靠，比格犬頸椎體形態(tài)與人類相似，脊柱序列完整，可操作性高，且比格犬飼養(yǎng)方便、手術(shù)耐受性高。(二)對(duì)隨機(jī)選出的四只比格犬C4/5椎間隙后縱韌帶組織行免疫組織化學(xué)染色分析，發(fā)現(xiàn)比格犬后縱韌帶分布有較

11、為豐富的交感神經(jīng)纖維，組間比較發(fā)現(xiàn)每高倍鏡視野下后縱韌帶壓迫組比假手術(shù)對(duì)照組有更為稠密的神經(jīng)纖維表達(dá)。(三)對(duì)兩組12只比格犬C4/5椎間隙后縱韌帶神經(jīng)纖維表達(dá)的神經(jīng)肽Y行放射性免疫分析，其結(jié)果為：后縱韌帶受壓組含有較明顯的交感神經(jīng)纖維增生(NPY濃度分別為：61.78pg/100μl；73.22pg/100μl；63.67pg/100μl；79.78pg/100μl)；65.33pg/100μl；68.81pg/100μl，與假手術(shù)對(duì)

12、照組(NPY濃度分別為：34.31pg/100μl；42.91pg/100μl；35.23pg/100μl；39.72pg/100μl；36.4lpg/100μl；40.62pg/100μl)相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS13.0,兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.001)。
　　 結(jié)論：從比格犬飼養(yǎng)容易、頸前路手術(shù)解剖結(jié)構(gòu)清晰、比格犬手術(shù)耐受力良好、內(nèi)固定牢靠及后縱韌帶取材方便等特點(diǎn)可知比格犬適宜建立頸椎動(dòng)物模型。對(duì)犬后縱韌帶