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文檔簡介
1、本論文來自于江蘇省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究專項課題“甘遂飲片的炮制機(jī)理研究”。甘遂為大戟科(Euphorbiaceae)大戟屬植物甘遂(Euphorbia kansui T.N。Liou ex T.P. Wang)的干燥塊根,系有毒中藥,生品僅限外用,內(nèi)服必須炮制。中國歷版藥典僅對甘遂藥材作了部分規(guī)定,缺乏其炮制品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),對炮制機(jī)理的研究更加匱乏。開展甘遂飲片炮制機(jī)理的研究,揭示其炮制減毒的科學(xué)內(nèi)涵,是確定其最佳炮制工藝,
2、制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),提高臨床療效的關(guān)鍵。
本論文系統(tǒng)地探究了甘遂各飲片的炮制方法的歷史沿革變化軌跡和前人的炮制原始意圖,同時綜合分析歸納了甘遂各飲片炮制的化學(xué)、藥理毒理及臨床應(yīng)用等相關(guān)領(lǐng)域的現(xiàn)代研究文獻(xiàn),為我們開展甘遂飲片的炮制機(jī)理研究,確定研究考察指標(biāo)及研究起點奠定了堅實的基礎(chǔ)。
本文選擇產(chǎn)于陜西的道地藥材甘遂的塊根作為研究對象,在藥效和毒理實驗評價跟蹤下,著重圍繞化學(xué)成分分析,尤其是所含毒效相關(guān)物質(zhì)巨大戟二萜醇
3、類成分的含量變化展開對甘遂飲片的炮制機(jī)理研究。首先通過藥理毒理學(xué)實驗比較了甘遂炮制前后粉末、水提液和醇提液的毒性、刺激性及瀉下作用的變化,結(jié)果表明甘遂醇提液醋制后LD50提高4倍左右,皮膚刺激性明顯下降,瀉下作用得到緩和,進(jìn)一步驗證了甘遂醋制減毒及緩和藥性的科學(xué)性。研究中同時發(fā)現(xiàn)甘遂的毒性和瀉下作用成分主要存在于乙醇提取物,水提液無明顯藥理活性;因此我們對甘遂醇提物進(jìn)行了溶劑極性分離,并對所得到的3個分離部位進(jìn)行了毒性評價,結(jié)果表明乙酸
4、乙酯部位的毒性最大,且醋制后毒性下降最為明顯,瀉下作用有所緩和;再通過對乙酸乙酯部位的進(jìn)一步硅膠柱色譜分離又得到四個部位,通過藥理實驗找到了甘遂的毒效部位.我們對毒效部位進(jìn)行了HPLC-MSn分析,結(jié)合文獻(xiàn)對照發(fā)現(xiàn)了其中大量的二萜類成分,尤其是巨大戟烷型二萜。我們又對甘遂的化學(xué)成分進(jìn)行了提取和跟蹤分離,得到了3個巨大戟二萜醇型化合物甘遂大戟萜酯C(Kansuiphorin C)、3-O-苯甲?;?20-去氧巨大戟二萜醇(3-O-benz
5、oyl-20-deoxyingenol)和3-O-(2'E,4'Z-癸二烯?;?-20-O-乙?;薮箨拼糩3-O-(2'E,4'Z-decadienoyl)-20-O-acetylingenol],1個三萜類化合物大戟醇(euphol)及2個其它成分β-谷甾醇(β-sitosterol)和正十六烷酸(n-hexadecanioc acid),并對其中的二萜類成分進(jìn)行了毒性驗證。最后,采用HPLC-MSn色譜分析技術(shù),對甘遂和醋甘遂
6、醇提液的化學(xué)成分進(jìn)行了比較分析,結(jié)果表明甘遂醋制后二萜類成分含量整體下降,尤其是3-O-苯甲?;?20-去氧巨大戟二萜醇和5-O-笨甲?;?20-去氧巨大戟二萜醇的下降最為明顯,最大下降了五倍左右。通過以上研究和分析,揭示了甘遂的炮制機(jī)理可能是醋制后導(dǎo)致了其中二萜類毒性成分含量的整體減少。
基于以上研究,選擇毒性成分3-O-(2'E,4'Z-癸二烯?;?-20-O-乙?;薮箨拼紴橹笜?biāo)化合物,以醋的用量、炒制溫度和炒制
7、時間為考察指標(biāo),采用正交試驗法Lg(34)優(yōu)選出了醋甘遂飲片的最佳炮制工藝:醋的用量為30%,炒制溫度控制在260℃,炒制時間為9min。結(jié)果顯示此工藝穩(wěn)定可行,重現(xiàn)性好。
在工藝研究的基礎(chǔ)上,我們按照2005版藥典要求,對甘遂和醋甘遂飲片進(jìn)行了一般質(zhì)量檢查,采用TLC法和化學(xué)方法對甘遂和醋甘遂飲片進(jìn)行了定性研究,采用HPLC測定了甘遂和醋甘遂飲片中甘遂大戟萜酯C、3-O-苯甲?;?20-去氧巨大戟二萜醇和3-O-(2'E
8、,4'Z-癸二烯?;?-20-O-乙酰基巨大戟二萜醇的含量,并檢測了各飲片的農(nóng)藥殘留等有害物質(zhì),建立了甘遂和醋甘遂飲片的質(zhì)量控制方法。
最后對甘遂飲片及其炮制品HPLC指紋圖譜進(jìn)行了初步探討,標(biāo)定了其中的17個共有特征峰,各特征峰的調(diào)整保留時間之比和相對峰面積之比符合指紋圖譜的要求,表明所建立的甘遂及醋甘遂HPLC指紋圖譜可用于全面有效地控制甘遂及醋甘遂的內(nèi)在質(zhì)量。
本論文的特色和創(chuàng)新點為:
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9、.以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo),從甘遂炮制品的臨床用藥實踐出發(fā),首次采用化學(xué)分離與藥效、毒理評價相結(jié)合的方法,闡明了甘遂的毒性部位(成分),揭示了甘遂炮制解毒的可能的物質(zhì)基礎(chǔ)及機(jī)理,為甘遂的安全有效的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù),并為有毒中藥的炮制機(jī)理研究提供借鑒。
2.首次以毒性成分3-O-(2'E,4'Z-癸二烯?;?-20-O-乙酰基巨大戟二萜醇為指標(biāo),采用正交試驗法建立了科學(xué)合理、簡便易行的甘遂飲片的最佳炮制工藝。
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