普羅布考對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠線粒體的影響.pdf

1、目的：近年，非酒精性脂肪性肝病(nonalconholicfattyliverdisease，NAFLD)的發(fā)病率逐年升高，其發(fā)病與2型糖尿病，高脂血癥，胰島素抵抗密切相關(guān)。非酒精性脂肪肝發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，但很多研究提示氧化應(yīng)激、線粒體功能紊亂在疾病發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。普羅布考是作用較強(qiáng)的抗氧化劑之一。本實(shí)驗(yàn)旨在研究線粒體功能紊亂在大鼠非酒精性脂肪肝中的作用，觀察普羅布考的干預(yù)效果并探討其機(jī)制，確立氧化應(yīng)激在非酒精性脂肪性肝病

2、發(fā)病機(jī)制中的重要作用。 方法：健康雄性SD大鼠24只，體重210±10克，隨機(jī)分成三組：正常對(duì)照組(NC組)8只，喂飼標(biāo)準(zhǔn)鼠食：模型組(HF組)和普羅布考干預(yù)組(PB組)各8只，喂飼高脂飼料。PB組給予普羅布考500mg/(kg.d)灌胃，其余兩組灌以相當(dāng)體積羧甲基纖維素鈉溶液。各組動(dòng)物喂養(yǎng)至18周末處死取材。稱量肝臟濕重計(jì)算肝指數(shù)(肝濕重/體重×100％)。測(cè)定血清ALT、AST、TG、TC以及肝組織勻漿TG、TC和FFA，測(cè)

3、定血清和肝線粒體MDA、SOD、GSH-PX等脂質(zhì)過(guò)氧化標(biāo)志物和抗氧化物質(zhì)水平，并計(jì)算血清SOD/MDA，測(cè)定肝組織ATP酶，熒光分光光度計(jì)法測(cè)定線粒體膜電位。常規(guī)制備HE染色，光鏡觀察肝臟病理變化，并用透射電鏡觀察肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，免疫組化觀察UCP2蛋白表達(dá)情況，RT-PCR檢測(cè)肝組織UCP2、PPARγ表達(dá)情況。所有數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析。 結(jié)果：喂養(yǎng)18周后，NC組大鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)大致正常，HF組大鼠肝臟重度

4、脂肪變，并出現(xiàn)輕到中度炎癥浸潤(rùn)和點(diǎn)片狀或灶狀壞死及纖維化，透射電鏡觀察顯示線粒體部分或大部分脊與膜融合或消失，PB組大鼠肝臟普通病理學(xué)以及超微病理學(xué)損害也較HF組顯著減輕。與NC組相比，HF組大鼠肝濕重、肝指數(shù)、血清ALT和AST水平、TC、LDL-c顯著升高(P<0.05)，HDL-c顯著降低(P<0.05)，肝組織勻漿FFA含量顯著升高(P<0.05)；PB組血清TC、LDL-c和肝組織勻漿FFA分別較HF組降低33.1％、21.5

5、％和13.9％(P<0.05)。與NC組相比，HF組大鼠血清和肝線粒體MDA水平都顯著升高(P<0.05)，肝線粒體SOD、GSH-PX和血清SOD/MDA顯著降低(P<0.05)。與HF相比，PB組血清和肝線粒體MDA水平都顯著降低，血清SOD、SOD/MDA和肝線粒體SOD、GSH-PX都顯著升高(P<0.05)。HF組肝線粒體Na-KATP酶、Ca-MgATP酶顯著低于NC組(P<0.05)，PB組肝線粒體Na-KATP酶、Ca-

6、MgATP酶較HF組顯著升高(P<0.05)，但是仍顯著低于NC組。在NC組大鼠肝組織UCP2偶在庫(kù)普弗細(xì)胞染色呈陽(yáng)性，未見(jiàn)肝細(xì)胞陽(yáng)性染色；HF組UCP2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和UCP2mRNA表達(dá)較NC組明顯增強(qiáng)；PB組較HF組明顯減少(P<0.05)。HF組PPARγmRNA較NC組表達(dá)明顯增強(qiáng)，PB組PPARγmRNA較HF組明顯減少(P<0.05)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功制備了大鼠非酒精性脂肪肝模型，非酒精性脂肪肝大鼠存在明顯線粒體功能