HPV感染狀態(tài)下宮頸癌hMLH1甲基化研究.pdf

1、目的:研究宮頸癌患者外周血清中人類錯(cuò)配修復(fù)基因hMLH1編碼基因(humanmutL homolog1)啟動(dòng)子區(qū)域5’-CpG島甲基化狀態(tài)，探討hMLH1基因啟動(dòng)子甲基化的相關(guān)影響因素。
　　 方法:選取浙江省腫瘤醫(yī)院2006年1月至2007年12月期間新發(fā)宮頸癌213例?；颊吣挲g在22-78歲，無(wú)家族惡性腫瘤病史及其他惡性腫瘤病史，患病期間均無(wú)妊娠，均經(jīng)宮頸活檢確診，取標(biāo)本前均未接受放化療治療。
　　 患者平均年齡(4

2、6.88±10.35)歲。以46歲為分界點(diǎn)分為高低年齡組:高年齡組102例，低年齡組111例，其中按照FIGO臨床分期:0期8例，Ⅰ期102例，Ⅱ期96例，Ⅲ期6例，Ⅳ期1例。病理分型:鱗癌197例，腺鱗癌4例，腺癌12例。根據(jù)有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移分組:淋巴轉(zhuǎn)移50例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移163例。治療前用特制宮頸刷采集宮頸脫落細(xì)胞，采用凱普導(dǎo)流雜交技術(shù)及其配套試劑（潮州凱普生物化學(xué)有限公司提供），對(duì)21種HPV基因型進(jìn)行分型檢測(cè)，包括高危型HPV(16

3、、18、31、33、35、39、43、45、51、52、58、59、66、68和cp8304),低危型HPV(6、42、44、53和54)，根據(jù)HPV檢測(cè)結(jié)果分組進(jìn)行研究。其中HPV陽(yáng)性136例，陰性77例。單一型HPV感染115例，二重感染13例，三重感染8例。單一感染中，HPV16型感染72例，52型、58型感染各8例，18型6例，59型感染5例，31型、45型、68型感染各4例，6型、cp8304型、42型、33型各1例。

4、　　 治療前采取患者外周靜脈血5ml，4℃冰箱靜置凝固后取上層血清，離心機(jī)4℃環(huán)境下離心12，000×g，離心6min，吸取上層血清液-70℃保存待檢。采用定量甲基化特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative methylation specificpolymerase chain reaction，qMSP)檢測(cè)患者外周血清DNA中hMLH1基因啟動(dòng)子區(qū)域5’-CpG島甲基化狀態(tài)，并分析其與不同年齡組，不同病理類型，是否存在淋巴

5、轉(zhuǎn)移及HPV感染，HPV多重感染及各亞型之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 ①宮頸癌患者外周血清中hMLH1基因啟動(dòng)子區(qū)域5’-CpG島甲基化的發(fā)生率是49.77％。
　　 ②伴有HPV感染的宮頸癌患者h(yuǎn)MLH1基因啟動(dòng)子區(qū)域5’-CpG島甲基化的發(fā)生率是75.00％，而在HPV陰性的宮頸癌患者中甲基化的發(fā)生率為5.20％。HPV陽(yáng)性組的甲基化率明顯高于陰性組(P＜0.001)。
　　 ③在單一型HPV感染

6、宮頸癌患者中hMLH1基因啟動(dòng)子區(qū)域5’-CpG島甲基化率為73.04％，在多重感染患者中為85.71％，多重感染者甲基化率及單一感染患者甲基化率高于無(wú)感染者(P＜0.001)，但多重感染者與單一感染者之間沒(méi)有明顯差異（P＞0.05）。
　　 ④單一的HPV16型感染者h(yuǎn)MLH1基因啟動(dòng)子區(qū)域5’-CpG島均存在甲基化，明顯高于18型及其他類型的感染者(P＜0.001)。
　　 ⑤宮頸癌患者外周血清中hMLH1基因啟動(dòng)子

7、區(qū)域5’-CpG島甲基化率在不同年齡組、病理類型、病理分期及有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移中均沒(méi)有明顯差異(P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 ①hMLH1基因啟動(dòng)子區(qū)域5’-CpG島甲基化是宮頸鱗癌患者外周血清DNA的常見現(xiàn)象。
　　 ②hMLH1基因啟動(dòng)子區(qū)域5’-CpG島甲基化與HPV感染有密切的關(guān)系，與HPV感染的亞型有關(guān)，多重感染的發(fā)生率較單一感染的發(fā)生率高，但與是否存在多重感染無(wú)關(guān)，與患者年齡、宮頸癌的病理類型、病理