PKCβ-Egr-1對(duì)血管損傷或TNF-α誘導(dǎo)的MMP-9活化的調(diào)控作用.pdf

1、血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)的增殖和遷移在動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)和經(jīng)皮冠脈介入(percutaneous coronary intervention，PCI)術(shù)后再狹窄(restenosis，RS)的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起重要作用。在AS和血管損傷早期，血小板激活、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)以及各種生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的釋放，觸發(fā)VSMC由中膜向內(nèi)膜遷移，最終形成增厚的新內(nèi)

2、膜(neointima，NI)。其中，由VSMC或巨噬細(xì)胞所分泌的腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)是VSMC增殖和遷移的強(qiáng)有力的刺激因子。 基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)是降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的關(guān)鍵酶，MMP-9的活化、ECM的降解是VSMC增殖和遷移的前提。血管損傷和TNF-α均可刺激

3、MMP-9的合成和分泌。但是，調(diào)控MMP-9表達(dá)的信號(hào)途徑和轉(zhuǎn)錄機(jī)制尚未闡明。我們以往的研究顯示，蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)β通過(guò)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子Egr-1(early growth response-1)的表達(dá)，影響血管損傷誘導(dǎo)的VSMC的增殖和后續(xù)的NI增生，也參與調(diào)控佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA)誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)VSMC的增殖和遷移。我們推測(cè)PKC β/Egr

4、-1可能參與血管損傷或TNF-α誘導(dǎo)的MMP-9的活化。 本課題在小鼠股動(dòng)脈內(nèi)皮剝脫的模型和原代培養(yǎng)的小鼠主動(dòng)脈VSMC中，觀察血管損傷或TNF-α對(duì)MMP-9的活化作用，以及PKCβ或Egr-1基因敲除對(duì)MMP-9活化的影響。并進(jìn)一步探討血管損傷或VSMCs內(nèi)PKCβ所介導(dǎo)的下游細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路。研究結(jié)果總結(jié)如下： 1、小鼠股動(dòng)脈內(nèi)皮剝脫損傷后，MMP-9活性和抗原表達(dá)以時(shí)間依賴的方式同步增加，最大誘導(dǎo)表達(dá)在血管損傷后8

5、h；而PKCβ或Egr-1基因敲除顯著抑制內(nèi)皮剝脫損傷誘導(dǎo)的MMP-9活性和抗原的增加。 2、在原代培養(yǎng)的小鼠主動(dòng)脈SMC中，TNF-α以時(shí)間依賴方式誘導(dǎo)MMP-9 mRNA表達(dá)、抗原的合成、分泌和活化；PKCβ或Egr-1基因敲除顯著抑制TNF-α誘導(dǎo)的VSMC MMP-9的表達(dá)和活化。 3、在原代培養(yǎng)的小鼠主動(dòng)脈SMC中，TNFα可誘導(dǎo)Egr-1 mRNA在數(shù)分鐘內(nèi)快速增加，并在1h后迅速衰減，此種誘導(dǎo)表達(dá)被PKCβ

6、基因敲除所抑制，提示PKCβ是Egr-1的上游調(diào)控分子。 4、股動(dòng)脈內(nèi)皮剝脫和PMA刺激VSMC能快速誘導(dǎo)ERK1/2和JNK磷酸化水平增加，PKCβ基因敲除顯著抑制上述誘導(dǎo)效應(yīng)，提示ERK1/2和JNK可能介導(dǎo)血管損傷或VSMC內(nèi)PKCβ的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。以上結(jié)果提示：PKCβ/Egr-1參與調(diào)控體內(nèi)血管損傷和體外培養(yǎng)的VSMC內(nèi)TNFα誘導(dǎo)的MMP-9的活化，抑制PKCβ/Egr-1信號(hào)通路可能成為PCI后再狹窄防治的新的干預(yù)