Egr-1誘騙寡核苷酸下調(diào)MMP-9抑制原代培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞的遷移.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)轉(zhuǎn)染針對(duì)早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子-1(early growth response factor-1,Egr-1)的誘騙寡核苷酸(Egr-1 decoy ODNs)到大鼠動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞中,檢測(cè)各組早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子-1、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表達(dá)變化及測(cè)量各組平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的遷移,探討針對(duì)早

2、期生長(zhǎng)反應(yīng)因子-1的誘騙寡核苷酸對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠平滑肌細(xì)胞遷移的影響和作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 通過(guò)組織塊貼壁法進(jìn)行原代大鼠動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)和鑒定,設(shè)計(jì)合成Egr-1誘騙、誘騙對(duì)照寡核苷酸。轉(zhuǎn)染人工合成的針對(duì)Egr-1的誘騙寡核苷酸(Egr-1 decoy ODN),將培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞分為對(duì)照組(正常培養(yǎng)細(xì)胞)、誘騙組(轉(zhuǎn)染Egr-1的誘騙寡核苷酸)、誘騙對(duì)照組(轉(zhuǎn)染Egr-1誘騙雜碼寡核苷酸)。免

3、疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)各組不同時(shí)間Egr-1及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表達(dá),進(jìn)行圖像分析。對(duì)各組采用劃痕法測(cè)定平滑肌細(xì)胞的遷移距離。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以均值士標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,各組間比較應(yīng)用單因素方差分析,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 成功進(jìn)行原代VSMC培養(yǎng),經(jīng)細(xì)胞鑒定培養(yǎng)細(xì)胞為高純度的血管平滑肌細(xì)胞。轉(zhuǎn)染Egr-1誘騙寡核苷酸后,用免疫組織化

4、學(xué)法分別觀察各組不同時(shí)間點(diǎn)的Egr-1和MMP-9蛋白的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):Egr-1誘騙寡核苷酸轉(zhuǎn)染后誘騙組的遷移距離明顯低于誘騙對(duì)照組和對(duì)照組(P<0.05),誘騙對(duì)照組和對(duì)照組沒(méi)有明顯的差異。同時(shí)發(fā)現(xiàn)Egr-1誘騙寡核苷酸轉(zhuǎn)染后Egr-1及MMP-9蛋白在誘騙組的表達(dá)較低,與誘騙對(duì)照組和對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外轉(zhuǎn)染Egr-1的誘騙寡核苷酸在一定程度上能夠通過(guò)抑制Egr-1蛋白的