EGR-1誘騙寡核苷酸下調MIF表達抑制大鼠血管平滑肌細胞遷移.pdf

1、目的：
　　 通過向原代培養(yǎng)的大鼠動脈血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)中轉染早期反應生長因子-1(early growth response fator,Egr-1)特異性誘騙寡核苷酸(decoy oligonucleotides,decoy ODN)和雜碼寡核苷酸(oligonuleotides SCR),檢測Egr-1、巨噬細胞移動抑制因子(macrophagemigrat

2、ion inhibitory factor,MIF)mRNA和蛋白表達變化,以及血管平滑肌遷移情況,探討Egr-1和MIF關系以及二者對體外平滑肌細胞遷移的影響。
　　 方法：
　　 通過組織塊貼壁法原代培養(yǎng)大鼠動脈血管平滑肌細胞,并通過非脂質體攜帶針對Egr-1的誘騙寡核苷酸進行細胞轉染,用RT-PCR、S-P免疫細胞化學染色法檢測不同時間點Egr-1和MIF表達情況,進行MetaMorphan圖像分析。同時利用劃傷愈

3、復法檢測VSMC遷移能力。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5進行統(tǒng)計分析,計量資料以均值±標準差表示,各組間比較應用單因素方差分析,p＜0.05有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 成功進行原代VSMC培養(yǎng),經(jīng)細胞形態(tài)學及S-P免疫組化鑒定培養(yǎng)細胞為高純度的VMSC。RT-PCR結果顯示:Egr-1誘騙寡核苷酸轉然后,Egr-1 mRNA表達隨著時間逐漸減少;MIF mRNA表達在48h達到高峰。同一時間點,誘騙組Egr-1及

4、MIF mRNA表達均顯著減少,與對照組、SCR組相比較有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。S-P法免疫組化結果顯示:對照組及SCR組VSMC Egr-1、MIF蛋白均有表達,兩組之間無明顯差異(p＞0.05),Egr-1誘騙組Egr-1、MIF蛋白表達顯著低于上述兩組,且均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。同時細胞劃傷愈復法結果顯示:與對照組姐SCR組比較,誘騙組中VSMC的遷移距離明顯減少(p＜0.05)。
　　 結論：