雪旺細胞的分離培養(yǎng)及RGD復合材料促進周圍神經(jīng)修復作用的研究.pdf

1、雪旺細胞(SCs)是周圍神經(jīng)系統(tǒng)一種重要的膠質細胞，能形成有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維的神經(jīng)內膜，具有多種生理功能，增生的雪旺細胞能分泌產(chǎn)生多種促進神經(jīng)再生修復的神經(jīng)營養(yǎng)因子與細胞粘附分子。隨著組織工程的發(fā)展，在構建的神經(jīng)導管支架材料上種植雪旺細胞，移植入體可以促進軸突生長，從而促進神經(jīng)修復，但如何快速獲取大量雪旺細胞是移植的關鍵。人工合成的神經(jīng)導管已被廣泛證明可以促進神經(jīng)再生，具有良好細胞親和性，能長期持續(xù)釋放神經(jīng)生長因子的生物材料逐漸

2、成為周圍神經(jīng)組織工程的研究熱點。 本文探討出一種可在短時間內分離培養(yǎng)成年大鼠雪旺細胞的方法，并能使其純度達到90％以上，數(shù)量在10<'6>/ml以上，來滿足臨床上修復周圍神經(jīng)損傷的需要。本實驗通過預變性大鼠坐骨神經(jīng)7天后，依次應用組織塊種植法，快速酶消化法和雙差速貼壁，對得到的細胞進行分離純化，通過鏡下胎盼藍細胞計數(shù)和S-100免疫組化染色鑒定，對分離得到的原代雪旺細胞進行數(shù)量計算和純度計算，實驗結果顯示通過此法得到的雪旺細胞的

3、數(shù)量和純度均能達到組織工程化人工神經(jīng)的實驗要求。 利用各種神經(jīng)導管可成功橋接修復短段周圍神經(jīng)缺損已被許多實驗所證明，應用組織工程技術構建神經(jīng)導管，為修復長段周圍神經(jīng)缺損提供了新的方法和思路。本實驗以聚乳酸為基體材料，接枝了RGD多肽，添加了一定比例的β-TCP和神經(jīng)生長因子(NGF)，制備出一種新型的具有良好降解性能和藥物釋放性能的復合型神經(jīng)導管。通過對RGD復合導管材料進行體外模擬降解實驗，測定降解過程中浸泡液pH值的變化及材

4、料質量損失率，顯示PLA降解速度最慢，24周后膜質量損耗率僅為25％左右，PRGD/PLA，PRGD/PLA/TCP和PRGD/PLA/TCP/NGF膜降解速度相當，在24周時膜損耗率已超過50％。PRGD/PLA膜較PRGD/PLA/TCP，PRGD/PLA/TCP/NGF兩組材料pH值下降較快，四種材料的浸泡液在24周內PH值基本呈下降趨勢，PRGD/PLA/TCP和PRGD/PLA/TCP/NGF兩組材料在第2周左右達6.8，呈微