銅蘭蛋白AZURIN的提純及其對(duì)抗癌藥DDP增敏作用的研究.pdf

1、人類利用細(xì)菌及其產(chǎn)物治療腫瘤的探索經(jīng)歷了長達(dá)一個(gè)世紀(jì)的歷程。近年來發(fā)現(xiàn)來源于銅綠假單胞菌的含銅蛋白azurin可選擇性進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，與胞漿中的p53形成復(fù)合物，可引發(fā)人黑色素瘤和乳腺腫瘤體內(nèi)、外腫瘤細(xì)胞凋亡，對(duì)人體正常細(xì)胞和荷瘤小鼠沒有損害。本文首次在國內(nèi)成功克隆了銅綠假單胞菌azurin的基因，構(gòu)建了大腸桿菌的高效表達(dá)系統(tǒng)，建立了純化方法并制備了可溶性azurin表達(dá)蛋白。以口腔癌細(xì)胞系A(chǔ)cc2和Acc3及肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549為目標(biāo)，利

2、用大腸桿菌表達(dá)和純化的野生型azurin為實(shí)驗(yàn)材料，初步分析了銅在azurin中的分子構(gòu)象及其抗腫瘤生物活性中的作用。 順鉑(DDP)是現(xiàn)在臨床上廣泛使用的抗腫瘤藥物，但順鉑耐藥及其對(duì)機(jī)體的損傷和毒副作用是肺癌多學(xué)科綜合治療中的棘手問題，常常導(dǎo)致肺癌化療的失敗，并限制了鉑類藥物的廣泛應(yīng)用。我們以MTT在體外考察了兩者協(xié)同對(duì)肺癌A549細(xì)胞的增殖和毒性作用，同時(shí)在體內(nèi)將兩者聯(lián)合作用于小鼠移植性LLC實(shí)體瘤，研究其對(duì)腫瘤的生長抑制作