鉑類(lèi)抗癌藥物與銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白C端金屬結(jié)合肽的反應(yīng)機(jī)理研究.pdf

1、自從1967年Rosenberg等人發(fā)現(xiàn)順鉑具有抗癌療效，鉑類(lèi)抗癌藥物的作用機(jī)理就一直是人們關(guān)注的重點(diǎn)。雖然順鉑在臨床上應(yīng)用廣泛，但是接受順鉑治療的患者會(huì)出現(xiàn)惡心，嘔吐，聽(tīng)力障礙，神經(jīng)毒性等副作用，而且在治療后期會(huì)慢慢出現(xiàn)耐藥性。因此，克服順鉑的毒副作用以及耐藥性是眾多科學(xué)家急需解決的問(wèn)題。第二代抗癌藥物卡鉑和第三代抗癌藥物奧沙利鉑的出現(xiàn)就是為了解決以上難題。鉑藥物的抗癌機(jī)理是非常復(fù)雜的，包括藥物的細(xì)胞攝取，與細(xì)胞內(nèi)生物分子的作用，進(jìn)入

2、細(xì)胞核與作用靶點(diǎn)DNA結(jié)合，以及如何泵出細(xì)胞。其中的每一個(gè)過(guò)程對(duì)鉑藥物的抗癌活性都有很大的影響。
　　 人類(lèi)銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(hCTR1)有助于順鉑的細(xì)胞攝取，并且其胞外的N端結(jié)構(gòu)域已經(jīng)被證明能與鉑類(lèi)藥物配位。有證據(jù)表明在順鉑的細(xì)胞攝取過(guò)程中hCTR1胞內(nèi)的C端肽段也起到了至關(guān)重要的作用。本論文的研究工作主要包括鉑藥物、Cu(Ⅰ)與銅轉(zhuǎn)移蛋白(hCTR1)C端肽段(C8)的作用機(jī)理。我們利用UV-vis，ESI-MS以及NMR解析了C

3、8與鉑藥物反應(yīng)的速率，與Cu(Ⅰ)的結(jié)合常數(shù)，生成的產(chǎn)物組成，以及金屬的結(jié)合位點(diǎn)。
　　 第一章,主要通過(guò)調(diào)研文獻(xiàn)對(duì)本課題的研究背景，發(fā)展現(xiàn)狀，以及工作的意義做簡(jiǎn)單的介紹。第一節(jié),主要介紹順鉑的發(fā)展歷程和其它抗癌藥物的發(fā)展?fàn)顩r。第二節(jié),是關(guān)于順鉑的抗癌機(jī)理的論述，主要包括以下幾個(gè)方面:順鉑的細(xì)胞攝取，細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸，作用靶點(diǎn)和泵出。第三節(jié)和第四節(jié),則分別介紹了銅轉(zhuǎn)移蛋白(hCTR1)與銅，順鉑相互作用機(jī)理的研究。第五節(jié),論述了抗癌

4、藥物的發(fā)展趨勢(shì)。
　　 第二章,主要研究了位于hCTR1細(xì)胞內(nèi)的C端肽段與鉑類(lèi)藥物的反應(yīng)。hCTR1 C端結(jié)構(gòu)域的八肽(C8:VDITEHCH)被選擇作為研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用了UV-vis，HPLC，ESI-MS和NMR對(duì)反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。結(jié)果表明，C8在與順鉑和奧沙利鉑反應(yīng)的過(guò)程中表現(xiàn)出了較高的活性，其中-HCH序列是最容易與鉑類(lèi)藥物結(jié)合的位點(diǎn)。在C8與順鉑的反應(yīng)產(chǎn)物中，順鉑的兩個(gè)氨配體盡管是位于巰基結(jié)合位點(diǎn)的對(duì)位，仍可以與鉑

5、配位超過(guò)12小時(shí)。氨的釋放要反應(yīng)很長(zhǎng)一段時(shí)間后才能發(fā)生。結(jié)合在肽上的鉑可以發(fā)生遷移，并且在這一過(guò)程中氨配體仍然與鉑保持配位狀態(tài)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，hCTR1的C端肽段可以結(jié)合鉑類(lèi)藥物，通過(guò)轉(zhuǎn)移螯合的方式將鉑藥物輸送到細(xì)胞內(nèi)。
　　 第三章,是關(guān)于hCTR1細(xì)胞內(nèi)的C端八肽與Cu(Ⅰ)的反應(yīng)。首先，我們需要選擇合適的還原劑以保證Cu處于還原狀態(tài)。對(duì)比幾種常用的還原劑，20％的CH3CN既能保證Cu(Ⅰ)處于還原狀態(tài)，又不會(huì)與Cu(