原發(fā)性肝癌血清診斷與DNA修復(fù)基因XRCC1多態(tài)性研究.pdf

1、[研究背景與目的]： 原發(fā)性肝癌(簡稱：肝癌)具有明確的危險(xiǎn)因子，早期診斷主要依靠在高危人群中開展篩查和隨訪。影像學(xué)檢查是診斷肝癌的主要途徑，但是對肝內(nèi)小的良惡性病變的鑒別較為困難。AFP作為肝癌的輔助血清診斷指標(biāo)，敏感性和特異性有限。臨床上需要具有高度敏感性的肝癌特異性標(biāo)志物用于肝癌的篩查和診斷。研究顯示磷脂酰肌醇硫酸類肝素蛋白聚糖一3(GPC3)在肝癌組織中的陽性率達(dá)80﹪-90﹪，在血清中也可檢測到升高水平的GPC3蛋白，

2、被認(rèn)為是一個值得期待的肝癌特異性標(biāo)志物。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)和堿性磷酸酶(ALP)作為肝癌的輔助診斷指標(biāo)尚有爭議。CA19-9、CA242和CEA廣泛用于臨床消化系統(tǒng)腫瘤的篩查和監(jiān)測，對肝癌的診斷價值不高。由于肝癌的異質(zhì)性，單一指標(biāo)診斷肝癌的價值有限，但是聯(lián)合兩項(xiàng)或多項(xiàng)指標(biāo)有望提高診斷肝癌的敏感性。雖然多數(shù)肝癌患者具有明確的致病因子，但不是所有的危險(xiǎn)因素暴露者一生中均發(fā)生肝癌，提示遺傳因素或其與環(huán)境因素的相互作用也與肝癌的發(fā)生有關(guān)

3、。x線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因-1(XRCC1)編碼一種DNA修復(fù)酶，主要參與堿基切除修復(fù)(BER)。研究顯示XRCC1外顯子10 Arg399Gln多態(tài)性與發(fā)生慢性HBV感染和黃曲霉毒素B1(AFB1)暴露相關(guān)肝癌的危險(xiǎn)性相關(guān)。本研究主要探討血清GPC3、AFP、GGT、ALP、CA19-9、CA242和CEA等標(biāo)志物單獨(dú)及相互聯(lián)合檢測診斷肝癌的價值。并探討DNA修復(fù)基因XRCC1 Arg399Gln多態(tài)性是否與肝癌的易感性有關(guān)。 [

4、研究對象]： 1.血清腫瘤標(biāo)志物測定：54例原發(fā)性肝癌患者，男女比例為5：1，平均年齡57.5±12.82歲，為北京佑安醫(yī)院2006年系列住院患者，均根據(jù)2001年中國抗癌協(xié)會制定的肝癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為肝癌。對照組為同期住院的14例肝硬化患者，男女比例4∶1，平均年齡52.14±12.54歲，結(jié)合病史、生化指標(biāo)和影像學(xué)檢查診斷為肝硬化。 2．XRCC1 Arg399Gln多態(tài)性分析：50例原發(fā)性肝癌患者，男女比例4∶1，平均年

5、齡55.5±11.88歲。均為該院2006年住院患者，根據(jù)2001中國抗癌聯(lián)盟肝癌專業(yè)委員會制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，通過CT和B超、AFP結(jié)合病史確診為肝癌。對照組為同期住院的61例肝硬化患者，結(jié)合病史、生化指標(biāo)和影像學(xué)檢查確診的肝硬化，男女比例2.5∶1，平均年齡49.33±10.83歲。采集標(biāo)本后隨訪6個月沒有任何腫瘤的客觀證據(jù)。正常健康對照組為92例健康獻(xiàn)血員，符合獻(xiàn)血員健康體檢標(biāo)準(zhǔn)，年齡在20-40之間，沒有任何其它慢性疾病。以上三組人

6、群均為北京及周邊地區(qū)漢族居民。 [研究方法]： 1．酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒定量測定血清GPC3，全自動電化學(xué)發(fā)光法測定血清AFP，OLYMPUS-AU640全自動生化分析儀檢測血清GGT和ALP，常規(guī)ELISA測定血清CA19-9、CA24-2和CEA水平。收集同期所有患者匹配相關(guān)的臨床資料。ROC曲線評價各種指標(biāo)單獨(dú)及相互聯(lián)合對肝癌的綜合診斷價值。 2．用酚-氯仿抽提法提取外周血白細(xì)胞基因組DNA

7、，聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片斷長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析XRCC1-Arg399Gln多態(tài)性。收集可能與肝癌危險(xiǎn)性有關(guān)的各種危險(xiǎn)因素指標(biāo)，均為采集標(biāo)本一周之內(nèi)的臨床資料。 [結(jié)論]： 1.單獨(dú)GPC3診斷肝癌的價值有限。22.9﹪AFP陰性(<200ng/ml)的肝癌患者6PC3陽性，GPC3聯(lián)合AFP可顯著提高診斷肝癌的敏感性(50﹪)。GPC3可能有助于早期肝癌的診斷。GGT對肝癌具有一定的診斷價值，GGT(≥1

8、00U/L)聯(lián)合AFP也能顯著提高診斷肝癌的敏感性。CA19-9、CA24-2和CEA診斷肝癌的價值不高。血清CA19-9水平與肝臟儲備功能有關(guān)，可作為肝功能監(jiān)測指標(biāo)。聯(lián)合兩項(xiàng)指標(biāo)，AFP+GGT具有最高的診斷效率。聯(lián)合三種及以上指標(biāo)并不能顯著提高診斷肝癌的敏感性。 2.XRCC1-399Gln等位基因型在北京及周邊地區(qū)大于50的慢性肝病患者中顯示出對發(fā)生肝癌的保護(hù)效應(yīng)。血清AFP≥20ng/ml為肝癌獨(dú)立的危險(xiǎn)因子。Arg39