DNA雙鏈斷裂修復(fù)基因XRCC2和XRCC5多態(tài)性與肺癌關(guān)系的研究.pdf

1、目的：肺癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，吸煙與職業(yè)危險(xiǎn)因素足肺癌的主要原因。與從不吸煙者相比，吸煙者發(fā)生肺癌的風(fēng)險(xiǎn)高出 10～15倍。然而只有一小部分人吸煙者患肺癌，說(shuō)明對(duì)肺癌易感性存在個(gè)體差異。推測(cè)這些個(gè)體間差異是由DNA修復(fù)基因突變所致。許多致癌物可以引起DNA損傷，然而通過(guò)DNA修復(fù)機(jī)制，可以恢復(fù)基因組完整性。DNA雙鏈斷裂修復(fù)(Repair of DNA double-strand breaks，DSB-R)包括剛源重組修復(fù)(ho

2、mology recombination，HR)和非同源末端連接(non-homologyend joining，NHEJ)路徑。這些途徑需要諸如RAD5 1、某些X線交義互補(bǔ)基因等參與，這對(duì)維持基因組穩(wěn)定性很重要。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)肺癌患者DNA修復(fù)能力低于健康人，而越來(lái)越多的研究表明DNA修復(fù)基因單核苷酸多念性(single nucleotide polymorphism，syP)影響個(gè)體間DNA修復(fù)能力，其可影響個(gè)體腫瘤易感性，并可能對(duì)腫瘤

3、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及化療藥物的敏感性產(chǎn)生影響。對(duì)于DSB-R途徑，已經(jīng)報(bào)道XRCC2(Arg188His)突變等位基因明顯增加非細(xì)胞肺癌(NSCLC)的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，XRCC9(Thr297Ile)和ATR(Thr211Met)突變等位基因起保護(hù)作用，與NSCLC 風(fēng)險(xiǎn)降低有關(guān)。涉及HR和NHEJ XRCC基因的功能正常是保持基因組穩(wěn)定性的重要因素，許多有關(guān)XRCC基因敲除的研究證實(shí)，那些影響NHEJ的XRCC基因增加淋巴腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)，而那些影

4、響HR的XRCC基因?qū)е氯橄侔┖涂赡艿膵D科腫瘤風(fēng)險(xiǎn)。XRCC2與XRCC5均為DNA雙鏈斷裂修復(fù)基因，分別在HR的早期階段和NHEJ中發(fā)揮重要作用。 為了探討XRCC2和XRCC5基因多態(tài)性在肺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用，本研究擬檢測(cè)XRCC2 基因C41657T、G4234C SNP和XRCC5基因G74582A、C74468A SNPs 在我國(guó)北方正常人群和肺癌患者中的分布，探討其與肺癌易感性的關(guān)系；以及XRCC2基因C4165

5、7T、G4234C SNP和XRCC5基因G74582A、C74468A SNPs 對(duì)肺癌分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響；應(yīng)用MTT法檢測(cè)的腫瘤細(xì)胞對(duì)鉑類藥物化療敏感性分析其多態(tài)性對(duì)腫瘤細(xì)胞化療敏感性的影響。 方法 1．采用基于醫(yī)院的病例．對(duì)照研究方法，收集352例肺癌患者和404例健康對(duì)照個(gè)體的靜脈抗凝血5 ml，同時(shí)記錄其病史及個(gè)人相關(guān)資料。以蛋白酶K消化．飽和氯化鈉鹽析法提取外周血白細(xì)胞DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)．限制性片段

6、長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restrictionfragment length polymorphism，PCR-RFLP)和引物引入限制性內(nèi)切酶分析-聚合酶鏈反應(yīng)(primer-introduced restriction analysis- polymerase chai nreaction，PIRA．PCR)方法檢測(cè)XRCC2 C41 657T、G4234C 和 XRCC5C74468A、G7

7、4582A多態(tài)位點(diǎn)，以非條件Logistic回歸法計(jì)算經(jīng)年齡、性別及吸煙狀態(tài)校正的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的比值比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(95％confidence interval，95％CI)，并分析基因多態(tài)性對(duì)肺癌分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響。 2．對(duì)150例手術(shù)肺癌患者應(yīng)用MTT法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞對(duì)鉑類藥物的敏感性，同時(shí)應(yīng)用PCR-RFLP和PIRA-PCR方法檢測(cè)XRCC2、XRCC5多態(tài)性，分析基因多態(tài)性對(duì)化療藥物

8、敏感性的影響。 3．?dāng)?shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 11.5版軟件包(SPSS Company，Chicago，Illinois，USA)進(jìn)行，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。單體型頻率分析采用 EH軟件(1.2 version，Rockefeller University，New York)。 結(jié)果 1．肺癌組吸煙個(gè)體的比例(66.8％)明顯高于對(duì)照組(44.6％)(x<'2>=37.46，P<0.001)；吸煙可顯著

9、增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(經(jīng)年齡、性別校正OR=3.44，95％CI=2.37～4.98)。 2．XRCC2 C41 657T 多態(tài)性位點(diǎn)的 T 等位基因頻率在肺癌紕為20.6％，顯著高于健康對(duì)照組的14.5％(x<'2>=9.83，P=0.002)。兩組之間的3種基因型(C/C、C/T、T/T)分布亦有顯著性差異(x<'2>=9.45，P=0.009)。與C/C基因型相比，C/T基因型和攜帶T等位基因的基因型(C/T+T/T)可顯著

10、增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(經(jīng)性別、年齡和吸煙校正OR分別為1.48和1.53，95％CI分別為1.06～2.06和111～211)。根據(jù)病理類型分層分析發(fā)現(xiàn)：XRCC2 C41657T 多態(tài)可能與肺腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)；與C/C基因型相比，C/T基因型和攜帶 T 等位基因的基因型(C/T+T/T)可顯著增加肺腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(經(jīng)性別、年齡和吸煙校正OR 分別為1.85和1.89，95％CI分別為1.18～2.90和1.22～2.92)。根據(jù)個(gè)體吸

11、煙狀況分層分析發(fā)現(xiàn)：XRCC2 C41657T 多態(tài)位點(diǎn)可能與不吸煙人群的肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)；與C/C基因型相比，C/T 基因型和攜帶T等位基因的基因型(C/T+T/T)可顯著增加不吸煙人群患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)(經(jīng)性別和年齡校正OR分別為1.84和1.71；95％CI分別為1.12～3.04和1.05～2.78)。根據(jù)個(gè)體年齡、腫癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床TNM分期分層分析，均未發(fā)現(xiàn)與XRCC2 C41657T多態(tài)性相關(guān)。 3．XRCC2 G42

12、34C基因G/G、G/C、C/C基因型和G、C等位基因在肺癌組與健康對(duì)照組分布均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。根據(jù)肺癌病理類型分層分析發(fā)現(xiàn)：XRCC2 G4234C 多態(tài)可能與肺小細(xì)胞癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相火；與G/G 基因型相比，G/C基因型和攜帶C等位基因的基因型(G/C+C/C)可增加個(gè)體患肺小細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)(經(jīng)性別、年齡和吸煙校正OR分別為183和199，95％CI分別為1.01～3.30和1.13～3.52)。根據(jù)年齡進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，

13、XRCC2 G4234C 多態(tài)可能與肺癌的發(fā)病年齡相關(guān)，與G/G基因型相比，G/C基因型和攜帶C等位基因的基因型(G/C+C/C)可顯著增加老年人群(年齡≥60歲)患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)(經(jīng)性別和吸煙校正OR分別為1.84和1.90，95％CI分別為1.07～3.15和1.17～3.22)。根據(jù)個(gè)體吸煙狀況、肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期分層分析均未顯示與 XRCC2 G4234C多態(tài)性相關(guān)。 4．應(yīng)用EH軟件對(duì)XRCC2基因兩個(gè)SNP位點(diǎn)聯(lián)合

14、分析發(fā)現(xiàn)，肺癌組與健康對(duì)照組的4種單體型分布具有顯著性差異(x<'2>=10.98，P=0.012)，其中41657T/4234G單體型頻率在肺癌組為17.6％，顯著高于健康對(duì)照組的12.6％(x<'2>=8.63，P=0.003)。與41657C/4234G 單體型相比，41657T/4234G單體型可顯著增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.54，95％CI=1.15～2.05)。 結(jié)論 1.吸煙顯著增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

15、 2.XRCC2 C41657T多態(tài)與肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，這種作用在肺腺癌組更加明顯。C/T基因型和攜帶 T 等位基因的基因型(C/T+T/T)可顯著增加肺癌尤其是肺腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 3.攜帶XRCC2 C41657T T 等位基因的基因型(C/T+T/T)和C/T基因型可顯著增加不吸煙人群患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)。 4.XRCC2 G4234C多態(tài)與肺小細(xì)胞癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，攜講C 等位基因的基因型(G/C+C

16、/C)和G/C基因型可顯著增加肺小細(xì)胞癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 5.XRCC2 G4234C多態(tài)位點(diǎn)的攜帶C等位基因的基因型(G/C+C/C)和G/C基因型可顯著增加老年人群(年齡≥60歲)患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)。 6.與XRCC2 41657C/4234G單體型相比，41657T/4234G單體型可顯著增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 7．XRCC2 C41657T、G4234C多態(tài)性與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期無(wú)關(guān)。 8．XRCC5

17、C74468A的攜帶A等位基因個(gè)體(A/C+A/A)對(duì)肺癌患者由Ⅰ期向Ⅱ期發(fā)展具有一定的保護(hù)作用。 9．XRCC5 G74582A多態(tài)性與肺癌易感性之間無(wú)相關(guān)性。 10．XRCC5 C74468A、G74582A多態(tài)位點(diǎn)的聯(lián)合分析未發(fā)現(xiàn)其單體型與肺癌易感性相關(guān)。 11．XRCC2 C41657T SNP與患者腫瘤組織對(duì)CBP和DDP的敏感性相關(guān)；攜帶T等位基因(C/T+T/T 基因型)的患者，其腫瘤細(xì)胞對(duì)CBP的