以Rho-ROCK信號(hào)通路為靶點(diǎn)探討麻杏芎葶合劑干預(yù)低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)建立低氧性肺動(dòng)脈高壓（HPH）大鼠模型，探討HPH形成的病理機(jī)制，觀察具有宣肺逐瘀化痰法的麻杏芎葶合劑對(duì)HPH大鼠肺動(dòng)脈壓增高和血管結(jié)構(gòu)重建的干預(yù)作用。并通過(guò)觀察rock-1基因及蛋白在HPH大鼠肺組織中的表達(dá)水平，探討Rho/ROCK信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓的調(diào)控作用及麻杏芎葶合劑對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓干預(yù)的分子機(jī)制。
　　方法：Sprague-Dawley大鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)均分為正常組、HPH模型組和法舒地

2、爾對(duì)照組、中藥中劑量組、中藥高劑量組。采用常壓間斷低氧法：(10±0.5)％O2，每天間斷低氧6-8小時(shí)，每周缺氧6天，持續(xù)3周，建立大鼠HPH模型。每日放入低氧艙前給藥：法舒地爾組腹腔注射10mg/(kg·d)鹽酸法舒地爾注射液；中藥中劑量組給予10g/kg·d麻杏芎葶合劑藥液灌胃；中藥高劑量組給予20g/kg·d麻杏芎葶合劑藥液灌胃；正常組、HPH模型組按每100g體重1ml的生理鹽水灌胃。在第21天測(cè)定各組大鼠平均肺動(dòng)脈壓力（me

3、an pulmonary artery pressure，mPAP）、平均頸動(dòng)脈壓力（mean cervical arterial pressure，mCAP）、右心肥厚指數(shù)（right ventricular hypertrophy index，RVHI）；觀察光鏡下肺小動(dòng)脈的形態(tài)學(xué)改變，利用圖像分析計(jì)算血管壁厚度占外徑的百分比（WT%）、管壁面積占血管總面積的百分比（WA%）及管腔面積與管總面積的百分比（LA%）。測(cè)定肌型動(dòng)脈、部分

4、肌型動(dòng)脈和非肌型血管所占比例及肌型肺小動(dòng)脈中膜細(xì)胞核密度，觀察肺血管結(jié)構(gòu)重建情況。在證實(shí)HPH建模成功后，應(yīng)用Real time PCR、Westen bolt等技術(shù)，以分子生物學(xué)方法測(cè)定各組大鼠肺組織中Rho激酶ROCK-1基因及蛋白的表達(dá)量，并測(cè)定各組大鼠肺組織中Rho激酶底物——MBS Thr-697位的磷酸化的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　（1）低氧21天后，HPH模型組大鼠mPAP、RVHI、WT%、WA%、LA%、

5、肌型動(dòng)脈、部分肌型動(dòng)脈和非肌型血管所占比例、肌型肺小動(dòng)脈中膜細(xì)胞核密度分別為（30.27±1.47）mmHg、（41.41±3.71）%、（55.23±3.07）%、（83.12±5.90）%、（16.88±1.74）%、（57.26±0.26）%、（17.46±2.78）%、（25.28±3.07）%、（9.41±1.90），與正常組（16.14±0.38）mmHg、（24.65±1.85）%、（33.41±3.65）%、（54.23

6、±4.61）%、（45.76±3.23）%、（7.88±0.83）%、（25.76±2.05）%、（66.36±3.65）%、（7.05±1.37）比較均有差異（P均＜0.05）。
　?。?）低氧21天后大鼠mPAP、RVHI、WT%、WA%、LA%、肌型動(dòng)脈、部分肌型動(dòng)脈和非肌型血管所占比例、肌型肺小動(dòng)脈中膜細(xì)胞核密度，法舒地爾組大鼠分別為（18.85±0.65）mmHg、（30.24±1.82）%、（38.15±2.96）%、

7、（68.49±4.16）%、（31.50±3.53）%、（12.49±0.65）%、（36.58±2.55）%、（50.94±2.96）%、（13.13±2.61）；中藥中劑量組大鼠分別為（21.61±0.38）mmHg、（28.19±1.67）%、（43.12±3.61）%、（65.49±4.15）%、（34.51±3.38）%、（20.71±0.21）%、（30.86±2.03）%、（48.43±3.61）%、（11.28±1.08

8、）；中藥高劑量組大鼠分別為（23.25±1.19）mmHg、（27.64±1.55）%、（44.53±3.76）%、（69.90±4.22）%、（30.10±3.37）%、（20.77±0.19）%、（29.08±2.57）%、（50.15±3.76）%、（7.26±1.68）；以上三組分別與HPH模型組（30.27±1.47）mmHg、（41.41±3.71）%、（55.23±3.07）%、（83.12±5.90）%、（16.88±1

9、.74）%、（57.26±0.26）%、（17.46±2.78）%、（25.28±3.07）%、（9.41±1.90）比較均有差異性（P均＜0.05）。
　?。?）各組間mCAP比較未見顯著性差異（P均＞0.05）。
　?。?）HPH模型組大鼠肺小血管管壁明顯增厚；出現(xiàn)明顯肺小動(dòng)脈重構(gòu)特征：內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)性破壞，血管內(nèi)皮呈立方形或柱狀突向血管腔，甚至壞死脫落，中膜平滑肌細(xì)胞肥大、增生，管腔變小。與 HPH模型組比較，法舒地爾干

10、預(yù)組、中藥中、高劑量組大鼠肺小血管管壁較薄，管腔變寬，血管平滑肌細(xì)胞的肥大、增生程度以及內(nèi)膜的增厚明顯減輕
　　經(jīng)低氧干預(yù)三周（21天）后，HPH模型組大鼠 Rho激酶ROCK-1mRNA（2.680±0.061）與正常組大鼠（1.094±0.051）比較增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。法舒地爾組、中藥中、高劑量組大鼠Rho激酶ROCK-1mRNA（1.661±0.0.90）、（2.035±0.078）、（1.962±0.

11、066）較正常組（1.094±0.051）均增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，較HPH模型組大鼠（2.680±0.061）均降低，差別亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。
　?。?）應(yīng)用Western印跡法檢測(cè)，HPH模型組ROCK-1蛋白表達(dá)較正常組增加（P＜0.05），經(jīng)法舒地爾、麻杏芎葶合劑干預(yù)過(guò)的法舒地爾組、中藥中、高劑量組ROCK-1蛋白表達(dá)較正常組升高（P＜0.05），較HPH模型組有不同程度降低（P＜0.05）。

12、
　?。?）免疫印跡結(jié)果顯示，HPH模型組P-MYPT1蛋白表達(dá)較正常組增加（P＜0.05），經(jīng)法舒地爾、麻杏芎葶合劑干預(yù)過(guò)的法舒地爾組、中藥中、高劑量組P-MYPT1蛋白表達(dá)較正常組升高（P＜0.05），而較HPH模型組有所降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）麻杏芎葶合劑可以減輕低氧引起的肺動(dòng)脈壓力的增加，改善右心室肥厚，肺血管結(jié)構(gòu)重建，對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓有明確防治、干預(yù)作用。
　?。?）Rho/RO