FK506對肝移植受者外周血T細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共刺激信號分子表達(dá)的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:動態(tài)分析術(shù)后使用他克莫司(Tacrolimus，又名FK506)的肝．移植受者外周血T細(xì)胞及其亞群，同時分析T細(xì)胞表面活化共刺激分子CD28、抑制性共刺激分子CDl52、T細(xì)胞活化效應(yīng)共刺激分子ICOS及參與T、B細(xì)胞活化的共刺激分子CDl54的表達(dá)情況，探討FK506對T細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路的影響，以期進(jìn)一步理解FK506免疫抑制作用靶位點，為制定更加合理的器官移植后免疫調(diào)節(jié)方案提供理論依據(jù)，并為FK506應(yīng)用于其它免疫相關(guān)疾病的治

2、療打下理論基礎(chǔ)。同時分析使用環(huán)孢菌素A(Cyclosporine A，CsA)的肝移植受者的上述指標(biāo)，以了解兩種臨床常用的鈣調(diào)磷酸酶抑制劑類藥物免疫調(diào)節(jié)作用的異同。 方法：以熒光標(biāo)記單克隆抗體結(jié)合流式細(xì)胞技術(shù)分析健康對照組(20 例)、終末期肝臟疾病患者組(簡稱：疾病對照組，20例)、肝移植術(shù)后接受FK506治療受者組(20例)和肝移植術(shù)后接受CsA治療受者組(簡稱：CsA治療組，10例)外周血T細(xì)胞及其亞群和T細(xì)胞表面CD28

3、分子、CDl52分子、ICOS分子及CDl54分子的表達(dá)。 結(jié)果：①疾病對照組患者CD3<'+>T細(xì)胞數(shù)與健康對照組比較無顯著差異(P>0.05)，但疾病對照組CD3<'+>CD4<'+>T淋巴細(xì)胞明顯增高(P<0.05)而CD3<'+>CD8<'+>T淋巴細(xì)胞明顯減少(P<0.05)，CD4<'+>T淋巴細(xì)胞與CD8<'+>T淋巴細(xì)胞比值(CD4／CD8Ratio)明顯高于健康對照組(P<0.05)，T細(xì)胞亞群平衡紊亂。CD

4、28分子和CD152分子在CD4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞上的表達(dá)率均明顯高于健康對照組(P<0.05)而ICOS分子表達(dá)明顯低于健康對照組(P<0.05)；CDl54分子在疾病對照組CD4<'+>T細(xì)胞上的表達(dá)無顯著變化(P>0.05)，而CD8<'+>T細(xì)胞上CD154分子的表達(dá)則明顯低于健康對照組(P<0.05)。CD8<'+>CD28<'->調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)在疾病對照組和健康對照組無顯著差異(P>0.05)②肝移植術(shù)

5、后1月內(nèi)，F(xiàn)K506平均血藥谷濃度維持在8.58±3.29ng／ml至10.08±5.82ng／ml之間，各治療組間血藥濃度無顯著差別(P>O.05)；治療8周組和治療12周組FK506平均血藥谷濃度分別為8.98±4.35 ng／ml和6.09±2.97ng／ml。各FK506治療組患者CD3<'+>T細(xì)胞表達(dá)無明顯變化，均接近健康對照組水平(P>0.05)且各治療組間差別也無統(tǒng)計學(xué)意義(P>O.05)；但是，T細(xì)胞亞群發(fā)生了明顯變化

6、。隨著治療的進(jìn)行，CD3<'+>CD4<'+>T細(xì)胞表達(dá)逐漸降低，自治療2周組起，明顯低于疾病對照組(P<0.05)并接近健康對照組水平(P>0.05)，至治療12周組已明顯低于健康對照組(P<0.05)：CD3<'+>CD8<'+>T細(xì)胞數(shù)逐漸升高，自治療2周組起明顯高于疾病對照組(P<0.05)并接近健康對照組(P>0.05)，治療4周后CD3<'+>CD8<'+>T表達(dá)趨于穩(wěn)定，維持在健康對照組水平(P>0.05)；CD4／CD8

7、比值逐漸降低，自治療2周組起降低至接近健康對照組水平(P>0.05)，至治療12周組明顯低于健康對照組(P<0.05)。CD28分子和CDl52分子自治療1周組起就出現(xiàn)明顯變化。CD28分子表達(dá)降低，各治療組CD4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞上CD28分子的表達(dá)率均低于健康對照組，其中在治療3周組和治療4周組明顯低于健康對照組水平(P<0.5)，治療8周后CD28分子的表達(dá)稍有回升但仍低于健康對照組水平。CDl52分子在各FK5

8、06治療組的T細(xì)胞各亞群上的表達(dá)均顯著高于健康對照組(P<0.05)。FK506治療組受者的CD8<'+>CD28<'->調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)增加，自治療3周組起開始明顯低于疾病對照組(P<0.05)，自治療4周組起明顯高于健康對照組(P<0.05)。ICOS分子表達(dá)自治療后第2周起顯著下降，除治療l周組CD8<'+>ICOS<'+>T細(xì)胞外，ICOS分子在CD4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞表面的表達(dá)均明顯低于健康對照組(P<0.5

9、)。治療8周后ICOS分子的表達(dá)稍有回升但仍明顯低于健康對照組(P<0.05)。共刺激分子CDl54在各FK506治療組T細(xì)胞亞群上的表達(dá)均未見顯著升高，均接近健康對照組水平(P<0.05)。在FK506治療1月內(nèi)，CD28分子和ICOS分子呈現(xiàn)相近的變化趨勢：CD4<'+>CD28<'+>T細(xì)胞數(shù)和CD8<'+>CD28<'+>T細(xì)胞數(shù)自治療l周組到治療3周組逐漸降低，治療4周組略有回升；CD4<'+>ICOS<'+>T細(xì)胞數(shù)自治療2

10、周組到治療3周組逐漸降低，治療4周組略有上升。⑧CsA治療8周組肝移植受者，CsA平均血藥谷濃度為184.89±55.16 μg／L，CD3<'+>T細(xì)胞數(shù)和CD4<'+>CD3<'+>T細(xì)胞數(shù)均稍高于健康對照組，CD8<'+>CD3<'+>T細(xì)胞接近健康對照水平(P>0.05)，CD4／CD8比值稍低于健康對照組，但差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。CD4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞上CD28分子的表達(dá)率稍高于健康對照組，但

11、差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；CD152分子在CsA治療8周組患者CD4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞上的表達(dá)均顯著高于健康對照組(P<0.05)；CD8<'+>CD28<'->調(diào)節(jié)性細(xì)胞表達(dá)與正常對照組比較無顯著差異(P>0.05)；ICOS分子在CsA治療8周組患者CD4<'+>和CD8<'+>T細(xì)胞亞群表達(dá)均明顯低于健康對照組(P<0.05)。CD154分子在T細(xì)胞表面表達(dá)明顯升高，CD4<'+>CDl54<'+>T細(xì)胞

12、數(shù)和CD8<'+>CD154<'+>T細(xì)胞數(shù)均明顯高于健康對照組(P<0.05)。④比較FK506治療8周組和CsA治療8周組各項指標(biāo)。兩個治療組CD3<'+>T細(xì)胞總數(shù)無顯著差別(P>0.05)，但是CD4<'+>CD3<'+>T細(xì)胞在FK506治療8周組的表達(dá)明顯低于CsA治療組(P<0.05)：FK506治療8周組CD8<'+>CD3<'+>T細(xì)胞表達(dá)和CD4／CD8比值均稍高于CsA治療組(P>0.05)。CD28分子在FK50

13、6治療8周組T細(xì)胞上的表達(dá)低于其在CsA治療8周組T細(xì)胞上的表達(dá)，其中FK506治療8周組CD8<'+>CD28<'+>T細(xì)胞比例還明顯低于CsA治療組(P<0.05)。FK506治療8周組CD4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞上CDl52分子的表達(dá)均稍低于CsA治療8周組，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。CD8<'+>CD28<'->調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)在FK506治療8周組明顯高于CsA治療8周組(P<0.05)。CD4<'+

14、>T細(xì)胞表面ICOS分子的表達(dá)在FK506治療8周組低于CsA治療8周組，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；ICOS分子在兩個治療組的CD8<'+>T細(xì)胞表面均低表達(dá)，F(xiàn)K506治療組CD8<'+>ICOS<'+>T細(xì)胞數(shù)還明顯高于CsA抬療組(P<0.05)。T細(xì)胞表面CD154分子的表達(dá)在兩個治療組差別明顯，CsA治療8周組患者CD154分子表達(dá)明顯升高，CD4<'+>CDl54<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>CDl54<'+>T細(xì)

15、胞表達(dá)均明顯高于FK506治療8周組(P<0.05)。 結(jié)論：①終末期肝臟疾病患者體內(nèi)免疫功能紊亂：T細(xì)胞亞群平衡明顯偏移，并以CD4<'+>T細(xì)胞活躍亢進(jìn)為主。CD28和CD152分子的高表達(dá)參與了患者體內(nèi)CD4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞的免疫調(diào)控，ICOS分子的作用在兩個T細(xì)胞亞群均被抑制，CDl54分子在該組患者中未發(fā)揮明顯作用。②FK506在肝移植術(shù)后受者外周血T細(xì)胞亞群紊亂的糾正中發(fā)揮重要作用。FK506不

16、影響外周血T細(xì)胞總數(shù)，但對T細(xì)胞亞群間平衡的調(diào)節(jié)起重要作用，且對CD4<'+>T細(xì)胞免疫活化的抑制作用更加明顯、持久。③FK506對參與淋巴細(xì)胞活化和效應(yīng)調(diào)節(jié)的細(xì)胞信號分子CD28、CDl52、ICOS和CDl54有明顯的調(diào)節(jié)作用，可通過影響免疫細(xì)胞信號傳導(dǎo)發(fā)揮免疫抑制作用。④FK506通過上調(diào)CD8<'+>CD28<'->調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞表達(dá)，抑制Th細(xì)胞的增殖活化和抗移植物抗體的產(chǎn)生，達(dá)到抗排斥反應(yīng)的目的。⑤FK506對CD28分子

17、和CDl52分子具有更敏感的調(diào)節(jié)作用；FK506對ICOS分子的調(diào)節(jié)作用部分通過其對CD28分子的調(diào)節(jié)實現(xiàn)。⑥CsA在移植術(shù)后受者外周血T細(xì)胞亞群紊亂的糾正中也發(fā)揮重要作用。CsA不影響外周血T細(xì)胞總數(shù)，對T細(xì)胞亞群間平衡的調(diào)節(jié)起重要作用。FK506對CD4<'+>T細(xì)胞的抑制作用強于CsA。⑦FK506與CsA對細(xì)胞表面信號分子的調(diào)節(jié)作用存在差異。與FK506不同的是：第一，CsA主要通過上調(diào)負(fù)性共刺激分子CDl52的表達(dá)而增加抑制性