三種結締組織體外誘導胎兒骨髓間充質干細胞分化的實驗研究.pdf

1、骨髓間充質干細胞(Bone marrow-derived mesenchymalstem cells，BMSCs)具有易于獲取，高度的自我更新能力，體外能大量擴增，可跨胚層分化為三個胚層來源的細胞等特點，因而被廣泛應用于組織工程、再生醫(yī)學及臨床多種疾病的細胞移植治療。BMSCs在體外能被誘導分化為上皮細胞，將體外培養(yǎng)的BMSCs移植到堿燒傷的兔角膜表面后，發(fā)現(xiàn) BMSCs 能向角膜基質遷移并向角膜上皮細胞分化，表明體內(nèi)局部微環(huán)境也可誘導

2、BMSCs分化成與微環(huán)境功能相適應的細胞，但其機理尚不十分清楚。課題組已有實驗表明胎兒腸壁結締組織能在體外誘導BMSCs分化為上皮細胞，本實驗擬比較羊膜、胎兒腸系膜及腸粘膜下層的結締組織在體外誘導BMSCs分化為上皮細胞的作用差異，從而為進一步研究局部微環(huán)境誘導BMSCs分化的機制及其在組織工程中的應用，提供理論基礎和實驗依據(jù)。 本文收集4～5個月引產(chǎn)胎兒的骨髓細胞，以全骨髓直接貼壁法和密度離心貼壁法分離、培養(yǎng)、擴增BMSCs，

3、比較兩種方法獲取BMSCs的數(shù)量。實驗觀察了不同濃度DAPI對P3 BMSCs的標記，并比較了其與凍存復蘇P3 BMSCs的DAPI標記率。將50μl(4×10<'6>個/ml)DAPI標記的P3 BMSCs種植于三種結締組織上誘導培養(yǎng)，另設同時加EGF和IGF-1的對照組，以及細胞爬片對照組。液面下培養(yǎng)7d后，升至液一氣平面培養(yǎng)。 各組誘導培養(yǎng)12d后的冰凍切片和鋪片經(jīng)免疫熒光染色。 文中通過實驗研究得出結論：1.全骨髓直接貼

4、壁法分離擴增獲取的BMSCs數(shù)多于密度離心貼壁法。2.DAPI標記BMSCs最佳終濃度是40ug/ml標記2h。3.EGF和IGF-1 在體外均有誘導BMSCs向上皮細胞分化的作用；兩者有協(xié)同作用，以30 ng/mlEGF 和50 ng/ml IGF-1 聯(lián)合的協(xié)同作用最強。IGF-1可能有誘導BMSCs向神經(jīng)細胞分化的作用。4.腸粘膜下層、腸系膜和羊膜的結締組織均能誘導 BMSCs 向上皮細胞分化，羊膜單獨誘導作用最強；三種結締組織中