CLC-3在大鼠異位心臟移植急性排斥期中的表達及意義.pdf

1、目前心臟移植已在臨床廣泛開展，全世界心臟移植每年以4000例左右的手術量增加，并取得了良好的臨床療效果，出現(xiàn)了一定數(shù)量生存質(zhì)量高及長期存活的群體。然而，急慢性免疫排斥反應及應用抗免疫排斥反應藥物的負作用仍然是影響移植物功能、受體生存時間及生活質(zhì)量的關鍵因素。 細胞凋亡又稱程序性細胞死亡(programmed cell death，PCD)是一種主動性細胞死亡方式，在維持心臟正常結構形態(tài)及心臟病理性重構方面有著重要的意義，在動物

2、模型和人體心肌活檢及尸檢上的許多研究證實，心肌細胞凋亡廣泛存在于心臟移植急性免疫排斥反應、移植物血管病及失活移植物中。 Bcl-2和Bax是一對與細胞凋亡最為密切的凋亡相關分子。Bcl-2和BaX的比值是決定細胞生死存亡的變阻器。Masashi以及Murray H等通過Bcl-2轉基因研究發(fā)現(xiàn)，高表達Bcl-2能減輕缺血再灌注損傷、急性免疫排斥反應及移植冠狀動脈血管病，減少心肌細胞凋亡。在不同細胞轉基因中的基礎研究發(fā)現(xiàn)

3、，Bcl-2還參與了眾多的離子通道功能的調(diào)節(jié)，高表達Bcl-2可增強細胞膜鈣離子的轉運能力，抑制電壓門控鉀通道，激活容量激活氯通道。 離子轉運在缺血再灌注損傷、細胞容積調(diào)節(jié)及凋亡中有著重要的意義，CLC-3屬于C1<'->通道家族β亞族，為電壓門控Cl<'->通道(vohage-gatedchloride channel)，目前關于CLC-3的研究雖然存在一些爭議，但多項研究提示C1C-3編碼了容積激活(volume-acti

4、vated)C<'->通道，廣泛分布于多種動物及人的心血管組織中，參與眾多生理病理過程，并在心肌缺血預處理晚期保護作用中發(fā)揮重要作用。最新的研究表明CLC-3還參與了BcL-2家族在腫瘤細胞中的抗凋亡作用，并對野百合堿及毒胡羅卜素誘導的細胞凋亡具有拮抗作用。表明ClC－3在免疫調(diào)節(jié)、細胞凋亡中有著重要的意義，然而，關于CLC－3在心臟移植急性免疫排斥反應、心肌細胞凋亡中的作用以及與Bcl－2家族的關系，目前尚不清楚。 本實驗通過

5、建立大鼠異位移植心臟模型，旨在對CLC一3在大鼠異位移植心臟急性排斥期中的表達變化進行初步的研究，以期初步了解CLC一3在移植心臟急性免疫排斥期中的作用，探討CLC一3與心臟移植急性免疫排斥反應、心肌細胞凋亡及Bcl－2的關系及CLC一3在臟移植急性免疫排斥期中心肌細胞凋亡傳導途徑的作用機制。 方 法 建立大鼠腹部心臟異位移植模型，分對照組及環(huán)孢菌素(CsA)組，每組32對。術后當天至術后7天或移植心臟停止搏動，每

6、天分別灌胃給予生理鹽水及CsA(15mg/Kg)干預，每組8只用于觀察移植心存活時間，術后第1、3、5、7天各6只動態(tài)切取標本，常規(guī)組織切片監(jiān)測排斥反應，TUNEL法檢測心肌細胞凋亡，免疫組織化法檢測Bcl－2和BAX的表達計算機圖像定量分析，免疫組化、RT—PCR、western blot檢測移植心肌組織CLC一3的表達及分布 1．C1C一3的表達隨免疫排斥反應的加重，心肌細胞凋亡的增加明顯降低，推測CLC一3在不同的微環(huán)境下

7、通過快慢門控通道的不同開放，不同離子通透性的選擇，調(diào)節(jié)細胞容積，引起調(diào)節(jié)性容積回縮和調(diào)節(jié)性容積增大，增加細胞穩(wěn)定性，以抵抗細胞腫脹壞死及細胞回縮凋亡。 2、CsA干預能明顯改善心臟移植急性免疫排斥反應中C1C－3表達的降低，減輕心臟移植急性免疫排斥反應，減少心肌細胞凋亡。CsA除抑制T淋巴細胞的增殖和分化，減輕免疫排斥反應，尚可通過對鈣神經(jīng)素的抑制作用及細胞鈣代謝的影響對病理狀態(tài)下的心肌細胞容積激活C1￣通道進行調(diào)解，減少心肌