乳腺癌轉(zhuǎn)移生物標(biāo)志物及中藥干預(yù)作用的初步研究.pdf

1、乳腺癌是一種嚴(yán)重危害婦女身心健康的常見惡性腫瘤，已成為西方發(fā)達(dá)國家女性腫瘤發(fā)病率的首位，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是乳腺癌患者死亡的最主要原因，通常晚期乳腺癌的五年生存率僅為20％，目前對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移的治療一直沒有明顯的突破，故提高判斷乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)確性，早期防治乳腺癌轉(zhuǎn)移已經(jīng)成為當(dāng)務(wù)之急，中藥以多靶點(diǎn)治療、全面干預(yù)、毒副作用相對(duì)少等優(yōu)勢在控制乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面占有不可替代的地位。乳腺癌轉(zhuǎn)移標(biāo)志物是評(píng)價(jià)腫瘤轉(zhuǎn)移潛力的重要依據(jù)，現(xiàn)有的傳統(tǒng)轉(zhuǎn)移標(biāo)志物對(duì)判斷

2、乳腺癌預(yù)后的靈敏度和特異性還有待提高，有資料顯示依靠這些標(biāo)志物對(duì)乳腺癌做出判斷后，仍有50％左右患者會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。生物標(biāo)志物具有檢測客觀、敏感性高等一直是腫瘤研究的熱點(diǎn)，目前對(duì)于乳腺癌轉(zhuǎn)移的特異性生物標(biāo)志物還有待進(jìn)一步研究，但腫瘤轉(zhuǎn)移過程大體分為粘附、降解、遷移和新生血管的形成4個(gè)階段，其中腫瘤細(xì)胞之間解粘附是轉(zhuǎn)移的第一個(gè)環(huán)節(jié)，被認(rèn)為是轉(zhuǎn)移的早期事件。蛋白酶是轉(zhuǎn)移的主要靶標(biāo)，細(xì)胞外基地膜降解是轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，并以此為靶標(biāo)的腫瘤治療方

3、案已經(jīng)應(yīng)用于臨床監(jiān)測和治療乳腺癌及其轉(zhuǎn)移，尋找乳腺癌轉(zhuǎn)移的不同時(shí)期生物標(biāo)志物，可望早期判斷乳腺癌是否復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移，防治乳腺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，同時(shí)以生物標(biāo)志物作為指標(biāo)評(píng)價(jià)藥物抗乳腺癌轉(zhuǎn)移的潛力有助于揭示中藥多靶點(diǎn)抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用特點(diǎn)。因此本研究采用原位移植方法建立小鼠乳腺癌4T1自發(fā)轉(zhuǎn)移模型，在接種腫瘤后不同轉(zhuǎn)移時(shí)期用western法檢測原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶(肺和淋巴結(jié))中相關(guān)生物標(biāo)志物表達(dá)的變化，用放免法檢測血清學(xué)指標(biāo)的變化，采用生化和組織學(xué)的同

4、步檢查對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)以臨床有效中藥復(fù)方“抗癌Ⅰ號(hào)”為模型藥物，觀察其對(duì)所研究標(biāo)志乳腺癌轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)記物的影響，為抗乳腺癌轉(zhuǎn)移藥物篩選提供有參考價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　1目的：
　　探討乳腺癌轉(zhuǎn)移不同時(shí)期不同部位時(shí)生物標(biāo)志物表達(dá)的變化，完善乳腺癌轉(zhuǎn)移的評(píng)價(jià)方法，為實(shí)現(xiàn)臨床前靶向性抗乳腺癌轉(zhuǎn)移的中藥篩選奠定基礎(chǔ)。
　　2方法：
　　建立小鼠乳腺癌4T1自發(fā)性轉(zhuǎn)移模型，于腫瘤接種后不同時(shí)間點(diǎn)用western法檢測各

5、組動(dòng)物正常乳腺、腫瘤、肺、淋巴結(jié)組織中E-鈣粘蛋白(E-CD)，基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)，雌激素受體(ER)，孕激素受體(PR)的表達(dá)情況；用放免法檢測各組動(dòng)物血清雌二醇，孕激素，糖類抗原153(CA153)的水平。
　　3結(jié)果：
　　3.1乳腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)生物標(biāo)志物研究
　　與對(duì)照組比較，腫瘤接種21d后，模型組動(dòng)物血清CA153未見明顯改變；腫瘤接種35d后，模型組動(dòng)物肺組織中E-CD表達(dá)降低，陽性藥CTX組

6、動(dòng)物肺組織中E-CD表達(dá)較模型組明顯增高，模型組動(dòng)物肺和淋巴結(jié)組織中MMP-9水平升高；隨著造模時(shí)間延長，腫瘤接種42d后，模型組肺組織中E-CD水平持續(xù)降低，模型組肺和淋巴結(jié)組織中MMP-9水平持續(xù)升高，MMP-9在轉(zhuǎn)移灶肺組織表達(dá)高于原發(fā)灶。
　　3.2中藥對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移干預(yù)作用的研究
　　與模型組比較，給藥2W后，中藥復(fù)方5.67g·kg-1劑量和CTX組動(dòng)物瘤體積明顯下降(分別為P<0.05和P<0.01)；給藥4W后

7、，中藥復(fù)方組荷瘤動(dòng)物去瘤體重有增高趨勢，但無顯著性差異。11.33g·kg-1劑量和CTX組動(dòng)物肺結(jié)節(jié)數(shù)明顯減少(P<0.05)，11.33g·kg-1劑量組動(dòng)物血清孕激素水平較模型組明顯升高(P<0.05)，中藥復(fù)方組肺組織中E-鈣粘蛋白表達(dá)明顯增加，CTX組動(dòng)物肺和淋巴結(jié)組織中MMP-9表達(dá)較模型組下降，中藥復(fù)方低劑量組肺組織中MMP-9表達(dá)下降。
　　4結(jié)論：
　　1)E-鈣粘蛋白表達(dá)下降與乳腺癌模型肺轉(zhuǎn)移有一定的相關(guān)