外泌體中CD82作為早期診斷乳腺癌的生物標志物研究.pdf

1、2018年國家癌癥統計中心公布的數據顯示，乳腺癌已經超過肺癌成為女性發(fā)病率最高的癌癥。在中國，每年乳腺癌新發(fā)病例大約為27萬，專家指出早診斷早治療，其治愈率可達90％以上，但由于診斷方法的滯后性，大多數患者診斷時已經錯過最佳治療期，以北京為例，首診為Ⅰ期的患者比例只占32％。目前診斷乳腺癌主要依靠彩超、CT、細針穿刺等，但這些方法均具有不能早期篩查或有創(chuàng)等缺點，所以積極尋找新的早期診斷乳腺癌的標志物迫在眉睫。
　　外泌體是直徑在3

2、0-150nm之間的脂質雙分子層結構的微小囊泡，大多數細胞在生理或病理狀態(tài)下均分泌外泌體，外泌體廣泛分布于人體體液中，包括外周血、唾液、尿液及羊水等。外泌體中包含豐富的蛋白質及遺傳物質，可被運輸到靶組織或靶器官行使其功能。CD82屬于四跨膜蛋白超家族成員，是廣譜的腫瘤轉移抑制因子，其在正常組織中高表達而其表達降低或缺失，與腫瘤的發(fā)生與進展有關。
　　目的：
　　在健康人、乳腺良性疾病及乳腺癌患者中，分別比較血清及血漿外泌體中

3、CD82表達的差異，以及組織切片中CD82表達量的差異，分析組織切片CD82表達量與外泌體中CD82含量之間的相關性，研究外泌體中CD82在乳腺癌早期診斷及預后評估中的應用價值。
　　方法：
　　研究對象240例，其中80例惡性乳腺癌、80例乳腺良性疾病及80例年齡匹配的健康人外周血作為對照，采用沉淀法快速提取血清和血漿中的外泌體;Nanosight方法檢測外泌體濃度及粒徑分布;ELISA及Western Blot檢測外泌體

4、標志性蛋白CD9及CD63的表達;ELISA檢測外泌體CD82的表達：Western Blot檢測外泌體中CD82及全血和血清中CD82的表達;Image Studio Ver4.0軟件計算蛋白條帶的積分光密度值;免疫組化檢測組織切片中CD82的表達量;Imagepro-plus6.0軟件分析平均光密度量化組織中CD82表達量。
　　結果：
　　1.Nanosight方法檢測外周血提取的外泌體，能夠檢測到直徑為30-150n

5、m的微囊泡，且ELISA及Western Blot均能夠檢測到外泌體標記蛋白CD9、CD63的表達。
　　2.與良性乳腺疾病患者及健康體檢者相比，乳腺癌患者血清及血漿外泌體中CD82表達量明顯增高，差異有統計學意義(P＜0.05)。
　　3.外泌體中CD82表達量明顯高于外周全血及血清中其含量，差異有統計學意義(P＜0.05)。
　　4.與良性乳腺疾病組織及癌旁正常乳腺組織相比，乳腺癌組織CD82表達量明顯降低，差異有

6、統計學意義(P＜0.05)。
　　5.組織中CD82表達量與外泌體中CD82含量有顯著相關性(r2=0.7329，P=0.0019)。
　　結論：
　　1.采用SBI外泌體提取試劑盒能夠從外周血中成功提取形態(tài)完整的外泌體。
　　2.乳腺癌患者血清外泌體CD82含量明顯高于健康人及乳腺良性疾病患者，并且隨著乳腺癌分期的增高，其含量明顯升高。
　　3.外泌體中CD82含量明顯高于血清及全血中CD82的含量，說明