延遲全身亞低溫對永久性MCAO大鼠的神經(jīng)保護作用及對神經(jīng)元凋亡影響的研究.pdf

1、急性腦卒中是老年人首位的致殘原因，而缺血性腦卒中的發(fā)病率較出血性腦卒中的兩倍還高，因此缺血性腦卒中的治療倍受關(guān)注。缺血性腦卒中治療的關(guān)鍵是在早期治療，早期治療主要包括溶栓治療和神經(jīng)保護治療(神經(jīng)保護劑和亞低溫治療)。介入技術(shù)的發(fā)展和溶栓劑的進步，尤其是rt-PA的應(yīng)用充分顯示了在溶栓時間窗內(nèi)使用可以顯著減輕神經(jīng)功能障礙。溶栓劑能夠加快血管再通，從而挽救缺血腦組織中尚處于可逆階段而瀕死的神經(jīng)細(xì)胞。然而，溶栓的時間窗很窄，禁忌癥較多，要求條

2、件較高，患者往往就診時缺血時間已較長，況且溶栓后血管再通繼發(fā)的再灌注損傷會加重腦水腫的形成和出血的可能，腦缺血后神經(jīng)元損傷，以及繼發(fā)的病理生理變化，如鈣超載、生成大量的氧自由基和NO、神經(jīng)元凋亡和生物膜的破壞及炎癥反應(yīng)等，這些因素又進一步加重腦損害。目前臨床使用的神經(jīng)保護劑的使用界果也都不很令人滿意。 基于上述原因，腦缺血后的神經(jīng)保護在卒中治療中是一個極為重要的課題。為了促進大腦功能恢復(fù)和減少神經(jīng)系統(tǒng)的后遺癥，亞低溫治療越來越受

3、到重視。亞低溫治療可以在相當(dāng)程度上阻斷這種惡性循環(huán)，起到神經(jīng)保護作用。 目的： 通過建立改良的永久性MCAO動物模型，研究缺血后在不同延遲時間點予以亞低溫治療對大鼠永久性MCAO的神經(jīng)保護效應(yīng)及其對神經(jīng)元凋亡的影響。 方法： 30只SD雄性大鼠隨機分為3組，每組10只，分別為A組 (MCAO 2h后予以33±0.5℃亞低溫22h)、B組(MCAO 6h后予以33±1℃亞低溫18h)和C組(MCAO常溫對照

4、組)。建立改良的永久性MCAO大鼠模型，均在MCAO后24h處死。A組和B組動物分別在MCAO后2h和6h時開始全身亞低溫處理，持續(xù)監(jiān)測直腸溫度，維持在33±0.5℃。各組動物在MCAO后24h進行Longa評分，隨即經(jīng)心臟灌流，取腦組織，又經(jīng)4％多聚甲醛固定后，依次經(jīng)過20％和130％的蔗糖溶液脫水制冰凍切片，切片保存在原位雜交保護液中。用CV染色分析腦梗塞灶體積占全腦的百分比，采用體積比法計算腦水腫程度。取經(jīng)過前聯(lián)合冠狀位的切片進行

5、TUNEL染色，比較亞低溫組與對照組細(xì)胞凋亡情況，研究亞低溫對缺血半暗帶內(nèi)神經(jīng)元凋亡的影響。 結(jié)果： 常溫對照組有2只大鼠在MCAO后24h時處于昏迷狀態(tài)，3只大鼠分別于MCAO后第14、16和17h死亡，死亡率為30％。亞低溫組A組和B組的大鼠在MCAO后24h全部存活，死亡率為0，B組有1只大鼠在MCAO后24h時處于昏迷狀態(tài)。 與對照組相比較，A組和B組梗死灶體積占全腦體積的百分比、腦水腫程度和Longa評

6、分均明顯降低，有統(tǒng)計學(xué)意義。在缺血半暗帶內(nèi)大腦皮質(zhì)區(qū)、紋狀體區(qū)和丘腦區(qū)TUNEL染色凋亡細(xì)胞計數(shù)A組和B組也均明顯少于對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義。 比較A組與B組，梗死灶體積占全腦體積的百分比A組明顯小于B組(P<0.05)；腦水腫程度A組低于B組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義； Longa評分A組小于B組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；大腦皮質(zhì)區(qū)、紋狀體區(qū)TUNEL染色凋亡細(xì)胞計數(shù)A組都少于B組，統(tǒng)計學(xué)上具有顯著差異，但丘腦區(qū)兩組差別沒有統(tǒng)計學(xué)意義。