延遲亞低溫對腦神經(jīng)血管單元及對MAPK途徑作用的初步觀察.pdf

1、研究背景:
　　缺血性腦卒中已成為人類致死、致殘的主要疾病之一，雖然已有溶栓、抗血小板聚集、卒中單元等對急性缺血性腦卒中有效的治療手段，但仍然有很多患者因為條件限制無法獲得及時、有效的治療。亞低溫干預(yù)已經(jīng)被證明是最有前景的神經(jīng)保護方法之一，本課題前期研究采用自發(fā)性高血壓大鼠永久性大腦中動脈閉塞模型發(fā)現(xiàn)，延遲亞低溫干預(yù)具有減小腦梗死體積以及減少神經(jīng)元凋亡、星形膠質(zhì)細胞死亡的神經(jīng)保護作用。因此本研究擬在此前期研究的基礎(chǔ)上，進一步探索延

2、遲亞低溫干預(yù)在自發(fā)性高血壓大鼠永久性大腦中動脈閉塞模型中的神經(jīng)保護作用及潛在機制。
　　研究目的:
　　1、觀察延遲亞低溫干預(yù)對腦小膠質(zhì)細胞和微血管內(nèi)皮細胞的影響
　　2、觀察延遲亞低溫干預(yù)能否對神經(jīng)血管單元發(fā)揮保護作用
　　3、觀察延遲亞低溫干預(yù)與MAPK(p-JNK、p-p38、p-EKR)蛋白激酶之間的關(guān)系。
　　研究方法:
　　分組:35只雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)隨機分為2h亞低溫組(A

3、組;9只);6h亞低溫組（B組;9只）;常溫組（C組;9只）與假手術(shù)組（D組;8只）。在A組，B組，C組應(yīng)用線栓法制作永久性大腦中動脈閉塞(pMCAO)模型。A組和B組動物分別在pMCAO2h和6h后給予全身亞低溫（肛溫維持33±0.5℃）;C組大鼠pMCAO術(shù)后置于室溫，D組手術(shù)術(shù)中不插入線栓，術(shù)后置于室溫。所有大鼠腦標本在術(shù)后第36h獲得，并制備成冰凍切片:
　　1，在避光條件分別單獨進行CD11b，vWF免疫熒光染色，觀察各

4、組大鼠小膠質(zhì)細胞聚集和新生微血管內(nèi)皮細胞在缺血皮層的數(shù)量變化情況;
　　2，在避光條件下分別單獨進行p-JNK，p-p38，p-ERK免疫熒光染色，觀察MAPK途徑蛋白激酶在缺血皮層的分布及信號表達情況;
　　研究結(jié)果:
　　pMCAO延遲亞低溫干預(yù)對小膠質(zhì)細胞的影響:CD11b染色顯示，無論在皮層梗死周邊以及核心區(qū)，pMCAO手術(shù)組CD11b陽性細胞數(shù)均較假手術(shù)組明顯增多。在皮層梗死周邊，手術(shù)常溫組與兩亞低溫組比較C

5、D11b陽性細胞數(shù)明顯增多;2h亞低溫組CD11b陽性細胞較6h亞低溫組進一步減少。在皮層梗死核心區(qū)，CD11b陽性細胞數(shù)變化與皮層梗死周邊變化相同。
　　pMCAO延遲亞低溫干預(yù)對腦微血管內(nèi)皮細胞的影響:vWF染色顯示，在皮層梗死周邊區(qū)，pMCAO手術(shù)組vWF陽性細胞數(shù)均較假手術(shù)組明顯增多。常溫組較兩亞低溫組vWF陽性細胞明顯增多，兩亞低溫組間vWF陽性細胞數(shù)未見明顯差異。
　　pMCAO延遲亞低溫干預(yù)對MAPK途徑的影響

6、:
　　1、p-JNK染色顯示，假手術(shù)組中未見p-JNK陽性細胞，在皮層梗死周邊區(qū)，手術(shù)常溫組p-JNK陽性細胞數(shù)較兩亞低溫組明顯增多，兩亞低溫組間p-JNK陽性細胞數(shù)未見明顯差異;
　　2、p-p38染色顯示，假手術(shù)組中未見p-p38陽性細胞，在皮層梗死周邊區(qū)，手術(shù)常溫組p-JNK陽性細胞數(shù)較兩亞低溫組明顯增多，兩亞低溫組間p-p38陽性細胞數(shù)未見明顯差異;
　　結(jié)論:
　　1、在自發(fā)性高血壓大鼠永久性大腦中動