山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞體外培養(yǎng)和表征.pdf

1、目的： 通過山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤纖維軟骨細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定，觀察關(guān)節(jié)盤纖維軟骨細胞的分離及體外擴增的條件和體外培養(yǎng)的生物學(xué)特性，研究其生物學(xué)特性及組織工程的細胞學(xué)基礎(chǔ)；對關(guān)節(jié)盤進行分區(qū)，定量計數(shù)各區(qū)中細胞數(shù)目，表征顥下頜關(guān)節(jié)盤中細胞的分型及分布，比較細胞體外培養(yǎng)后與原組織的差異，為顳下頜關(guān)節(jié)盤組織工程研究奠定基礎(chǔ)。 方法： 1、無菌條件下切取1月齡山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤，剪碎后用Ⅱ型膠原酶消化14 h，過濾后獲得關(guān)節(jié)盤

2、纖維軟骨細胞。在倒置相差顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)變化及貼壁率，測定其生長曲線，甲苯胺藍染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色鑒定，透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)。 2、完整切取山羊雙側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)盤，按內(nèi)外側(cè)向及前后向分別等分為三部分和兩部分，將關(guān)節(jié)盤分為六份。標記后用10％中性福爾馬林固定24 h，石蠟包埋后用組織學(xué)、免疫組化及電鏡技術(shù)檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤。HE染色觀察關(guān)節(jié)盤各帶細胞類型及數(shù)目的不同，甲苯胺蘭染色、Ⅰ型膠原免疫組化檢測膠原的分布，透

3、射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果： 1、原代培養(yǎng)的關(guān)節(jié)盤纖維軟骨細胞4 h可觀察到貼壁細胞，6 h開始伸展變形，24h基本全部貼壁，大部分細胞為圓三角形和多角形，小部分為長梭形，第7天時細胞彼此相連，鋪滿瓶底，細胞以長梭形為主，部分多角形。傳代后12h貼壁率達90％，大部分為多角形，5～6 d即可長滿瓶底。甲苯胺藍染色和Ⅰ型膠原免疫組化染色結(jié)果陽性。超微結(jié)構(gòu)顯示細胞內(nèi)線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達。 2、顳下頜關(guān)節(jié)盤由不均分布

4、的細胞和膠原纖維組成。膠原幾乎都為Ⅰ型，膠原纖維一般表現(xiàn)為波浪形或卷曲狀，纖維大致平行，而細胞散在膠原纖維基質(zhì)中。細胞有成纖維細胞樣細胞和軟骨細胞樣細胞兩種，其中前者占優(yōu)勢，兩者比例約為2.05:1。細胞類型和分布在各區(qū)沒有顯著性差異。電鏡超微結(jié)構(gòu)顯示成纖維細胞樣細胞核大，梭形或不規(guī)則形，細胞器很少。軟骨細胞樣細胞胞核圓形或橢圓形，周圍有電子透射區(qū)，細胞囊不明顯，偽足少見。 結(jié)論： 1、體外分離培養(yǎng)的山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤纖維