人惡性膠質(zhì)瘤細胞FPR表達與功能檢測及其治療學意義.pdf

1、既往有關趨化因子受體(chemokine receptor)功能的研究主要集中在其介導炎癥過程中的作用，近些年的研究已發(fā)現(xiàn)在惡性腫瘤中存在多種趨化因子，瘤細胞也表達相應趨化因子受體，它們對腫瘤的發(fā)展和演進起著重要而復雜的作用。新近本課題研究小組發(fā)現(xiàn)，7次跨膜G-蛋白耦聯(lián)受體超家族成員甲?；氖荏w(formylpeptide receptor，F(xiàn)PR)在高度惡性的膠質(zhì)瘤組織中呈選擇性表達，且與膠質(zhì)瘤的惡性級別和微血管密度有關；在其配體fM

2、LF刺激受體活化后，瘤細胞趨化作用增強，細胞內(nèi)Ca<'2+>動員增加；另外，利用小RNA干擾技術(smallinterference RNA，siRNA)抑制膠質(zhì)瘤細胞系U87-MG的FPR表達，瘤細胞增殖速度減緩，促血管生成因子VEGF等分泌減少；這些結(jié)果提示惡性膠質(zhì)瘤細胞中的功能性FPR可能具有更為重要和廣泛的生物學作用，并有望成為一種新的治療膠質(zhì)瘤的分子生物學靶點。膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最為常見的惡性腫瘤之一，以快速生長、高度侵襲以

3、及豐富的血管化和壞死病灶為主要特征，惡性膠質(zhì)瘤所表達的FPR在這些生物學行為方面的作用值得深入研究和探討，尤其是其治療學意義。我們以往有關膠質(zhì)瘤FPR表達與功能的研究所使用的材料是細胞系和腫瘤組織，膠質(zhì)瘤原代細胞在培養(yǎng)過程中是否維持功能性FPR表達尚不清楚。 諾帝(Nordy)是本課題研究組基于天然產(chǎn)物去甲二氫愈創(chuàng)木酸(nordihydroguaiaretic acid，NDGA)的化學結(jié)構(gòu)和效應，自行研制開發(fā)的新型抗癌候選藥物

4、。初步的實驗觀察顯示諾帝可抑制包括人惡性膠質(zhì)瘤在內(nèi)的多種腫瘤細胞的體外生長增殖，對膠質(zhì)瘤細胞系SHG-44和CHG-5細胞裸鼠移植瘤有明顯的抑制生長效應，并且，諾帝還具有抑制膠質(zhì)瘤細胞趨化因子受體CXCR4和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達的作用。但諾帝的抗腫瘤作用機制是否與抑制FPR功能性表達有關，尚需進一步研究和明確。為進一步深入了解惡性膠質(zhì)瘤中FPR表達及其功能意義，以及諾帝的抗腫瘤作用及其機制，本實驗以人膠質(zhì)瘤原代及短期傳代培養(yǎng)

5、細胞為實驗材料，主要觀察了膠質(zhì)瘤培養(yǎng)細胞FPR的表達、其配體激活受體后瘤細胞生長和血管生成因子產(chǎn)生的變化，以及諾帝對FPR表達及其功能的影響。主要研究結(jié)果和結(jié)論如下： 1．體外原代及短期傳代培養(yǎng)細胞由于能在一段時間內(nèi)保持體內(nèi)細胞的生長特性及功能狀況，為了便于研究人惡性膠質(zhì)瘤細胞FPR表達及功能學意義，我們首先進行了人惡性膠質(zhì)瘤細胞的原代培養(yǎng)，分別用組織塊培養(yǎng)法和胰酶消化法對手術切除的新鮮膠質(zhì)瘤組織標本進行培養(yǎng)，共培養(yǎng)成功9例，并

6、分別對其進行了初步鑒定。 2．采用間接免疫熒光細胞化學染色結(jié)合激光共聚焦顯微掃描技術檢測了人膠質(zhì)瘤原代及短期傳代培養(yǎng)細胞中FPR的表達，結(jié)果顯示：在高惡性級別(WHO Ⅲ、Ⅳ級)的5例膠質(zhì)瘤培養(yǎng)細胞中檢測到FPR陽性信號，呈不連續(xù)的線性熒光表達于瘤細胞胞膜，而在培養(yǎng)成功的其它低惡性級別(WHO Ⅰ、Ⅱ級)膠質(zhì)瘤細胞中未見FPR表達，進一步證實FPR在人惡性膠質(zhì)瘤組織及細胞中的表達是呈選擇性的，與腫瘤的惡性級別有關。 3．

7、配體fMLF激活FPR后，培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤細胞生長顯著增快，且此作用隨fMLF活化時間的延長而越發(fā)明顯，提示表達于惡性膠質(zhì)瘤細胞的FPR對其配體fMLF的刺激具有反應性，活化后的FPR可促進瘤細胞的體外增殖；利用ELISA技術檢測了FPR活化后對膠質(zhì)瘤細胞VEGF產(chǎn)生的誘導作用，結(jié)果顯示在10～1000nmol/L濃度范圍內(nèi)fMLF誘導的培養(yǎng)瘤細胞VEGF蛋白的分泌水平均較未刺激組明顯增加，且與fMLF的濃度呈劑量依賴性。這些結(jié)果表明膠質(zhì)瘤