SDF-1在間充質(zhì)干細(xì)胞中誘導(dǎo)的CXCR4-CXCR7表達(dá)的變化及其與PI3K-NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)系的研究.pdf

1、目的：探討經(jīng)間充質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)誘導(dǎo)后間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)中趨化因子受體4(CXCR4)/趨化因子受體7(CXCR7)表達(dá)的變化及其與磷脂酰肌醇3激酶(Phosphoinositide3-kinase，PI3K)/核因子-κB(Nuclear factor kappa B，NF-κB)信號(hào)通路的關(guān)系，為后期研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：⑴全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)、純化MSCs；⑵分別通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-P

2、CR)和蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測(cè)不同濃度SDF-1誘導(dǎo)前后MSCs中CXCR4和CXCR7 mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化；⑶分別以CXCR4拮抗劑AMD3100、CXCR7拮抗劑CCX733、PI3K抑制劑渥曼青霉素(Wortmanin)和NF-κB抑制劑二硫代氨基吡咯烷(PDTC)作為工具藥，通過(guò)RT-PCR和Western-blot法檢測(cè)MSCs中CXCR4和CXCR7在基礎(chǔ)狀態(tài)和干預(yù)狀態(tài)下mRNA、蛋白水平的

3、表達(dá)變化；⑷用Western-blot法觀察間充質(zhì)干細(xì)胞中蛋白激酶B(Akt)、NF-κB抑制蛋白(IKBα)的基礎(chǔ)狀態(tài)及各種因素干預(yù)時(shí)的磷酸化及非磷酸化水平。
　　結(jié)果：①M(fèi)SCs接種24～48h后，貼壁細(xì)胞多為圓形、梭形、多角形，第3代可見(jiàn)典型的旋渦狀生長(zhǎng)的梭形細(xì)胞；②MSCs低表達(dá)CXCR4和CXCR7，經(jīng)SDF-1誘導(dǎo)后兩者表達(dá)水平均明顯增高（P＜0.01），并呈現(xiàn)出濃度依賴(lài)性；③SDF-1+PI3K特異性抑制劑Wortm

4、annin處理組、SDF-1+PI3K特異性抑制劑Wortmannin+NF-κB特異性抑制劑PDTC處理組，SDF-1+CXCR4拮抗劑AMD3100處理組、SDF-1+CXCR7拮抗劑CCX733處理組、SDF-1+AMD3100+CCX733處理組與同濃度SDF-1單處理組相比，CXCR4、CXCR7蛋白表達(dá)明顯減少（P＜0.01），但仍高于正常對(duì)照組；④SDF-1+Wortmannin處理組、SDF-1+ Wortmannin+

5、PDTC處理組，SDF-1+AMD3100處理組、SDF-1+ CCX733處理組、SDF-1+AMD3100+CCX733處理組分別與同濃度SDF-1單處理組及正常對(duì)照組相比，Akt、IKBα蛋白水平無(wú)明顯變化(P＞0.05)，磷酸化Akt蛋白水平明顯減少（P＜0.01），p-IKBα蛋白水平明顯增多（P＜0.01）。
　　結(jié)論：⑴SDF-1可以濃度依賴(lài)的方式上調(diào)MSCs中CXCR4、CXCR7的表達(dá)；⑵PI3K/NF-κB信號(hào)